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为评估锦鲤贸易中鲤浮肿病毒（CEV）非致死性采样监测方法，研究发现环境样本敏感高，对防控有重要意义。
鲤浮肿病毒（Carp edema virus，CEV），这个属于痘苗病毒科（Poxviridae family）的 “小恶魔”，自上世纪 70 年代在日本被发现以来，就一直让锦鲤和鲤鱼养殖户们头疼不已。感染 CEV 的鱼就像被施了魔法一样，会出现精神萎靡、厌食、全身水肿、皮肤和鳃部病变等症状，死亡率更是高得吓人，最高可达 70 - 100%。这不仅给养殖户带来了巨大的经济损失，也严重威胁着全球锦鲤和鲤鱼养殖业的发展。
传统的检测 CEV 的方法是对鳃组织进行 DNA 分析，虽然鳃组织中病毒载量最高，但这种方法需要杀死鱼，对于无症状或高价值的锦鲤来说，显然不太友好。而且，CEV 常常在运输等应激事件后引发大规模疫情，目前的防控手段又无法有效阻止其传播。在这样的困境下，研究人员迫切需要找到一种更有效的监测方法，来阻止 CEV 的肆虐。
来自法国图卢兹大学（Université de Toulouse）、法国国家食品、环境及劳动卫生署（ANSES）等机构的研究人员挺身而出，开展了一项关于 “锦鲤贸易中鲤浮肿病毒监测：通过运输环境采样进行早期检测以及对批发商设施中 CEV 疫情的纵向监测” 的研究。他们的研究成果发表在《Veterinary Research》上，为我们带来了新的希望。
为了开展这项研究，研究人员主要运用了以下几种关键技术方法：
- 样本采集：从法国一家曾检测出 CEV 的观赏鱼批发商处，收集 2019 - 2022 年间的锦鲤进口样本，包括运输水、鱼袋拭子、麻醉鱼的鳃拭子以及自然死亡鱼的鳃等。
- DNA 提取：针对不同样本，采用不同的 DNA 提取方法，如使用相应试剂盒对拭子、水和死亡鱼鳃进行 DNA 提取。
- 病毒检测与分析：利用定量 PCR（qPCR）检测和定量 CEV DNA；通过 Sanger 测序和系统发育分析，研究病毒的遗传多样性；运用潜伏类模型评估不同采样方法的敏感性和批次流行率。
下面来看看具体的研究结果：
- CEV 在运输水和鱼袋拭子中的检测：研究发现，CEV DNA 在大多数运输水样本中都能被检测到，2019 年、2020 年和 2022 年的检测频率分别为 81%、100% 和 64%。鱼袋拭子和运输水样本的 CEV 阳性率相当，但运输水样本中的 CEV 基因组载量更高。而且，CEV 载量与总 DNA 浓度之间没有相关性。
- CEV 在鳃拭子和早期死亡鱼鳃中的检测：在部分运输袋中，CEV DNA 在运输水、鱼袋拭子、鳃拭子以及早期死亡鱼鳃中均未被检测到。在 CEV 阳性的运输袋批次中，2020 年有鱼在运输过程中死亡，其鳃中检测到 CEV DNA；2019 年和 2022 年，部分在到达后 4 天内死亡的鱼，其鳃中检测到 CEV DNA，但 2022 年的阳性率较低。鳃拭子中也检测到了 CEV DNA，但浓度较低。
- 运输死亡率对运输水和死鱼 CEV 载量的影响：2020 年运输过程中有鱼死亡，该年所有批次运输水都检测到 CEV DNA，但死鱼鳃中的 CEV 载量较低。而且，CEV 载量与死亡率之间没有相关性。
- 不同采样方法敏感性和批次流行率评估：通过潜伏类模型评估，发现运输水采样的敏感性最高，当采样 1.5mL 运输水时，敏感性估计值可达 98%（95% 可信区间：89 - 100%）。鱼袋拭子的敏感性高于鱼样本，而自然死亡鱼鳃和麻醉鱼鳃拭子池的敏感性较低。此外，估计进口锦鲤中 CEV DNA 的批次流行率在不同年份有所不同，2020 年最高，2022 年最低。
- 进口 CEV 的遗传多样性：系统发育分析表明，所有检测序列均属于 CEV 基因组 II 型。不同养殖户的样本序列存在差异，部分养殖户的序列具有一定的稳定性，而部分养殖户的样本则存在较高的多样性。在进口后的不同时间点，也检测到了不同的序列，这些序列与进口时的序列存在一定的关联。
研究结论和讨论部分指出，环境样本（如运输水和鱼袋拭子）适合用于锦鲤贸易中 CEV 的监测，其敏感性高，且采集方便、成本低、对鱼无伤害。通过检测运输水，可以在鱼放入养殖设施前确认病毒情况，以便及时调整检疫程序。虽然检测到 CEV DNA 并不一定意味着存在感染性粒子，但结合高病毒载量、感染鱼的死亡情况以及相同变异体的检测等证据，表明确实有活的 CEV 随锦鲤进口。此外，研究还发现一些锦鲤可能无症状携带 CEV 数周或数月，这也解释了为什么即使批次看起来健康，仍可能在到达数月后引发死亡疫情。
这项研究为锦鲤贸易中 CEV 的监测和防控提供了重要的理论依据和实践指导，为保护全球锦鲤和鲤鱼养殖业的健康发展迈出了坚实的一步。相信在研究人员的不断努力下，未来我们一定能够找到更有效的方法来战胜 CEV 这个 “小恶魔”，让锦鲤和鲤鱼养殖业重新焕发生机。
