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为探究 miR-34a-5p 在多囊卵巢综合征（PCOS）中的作用，研究发现其可调节 Notch 信号通路影响颗粒细胞功能，为治疗提供新靶点。
多囊卵巢综合征（Polycystic Ovary Syndrome，PCOS）是一种让许多青春期和育龄女性烦恼不已的代谢内分泌疾病。全球范围内，大约 6% - 21% 的女性受其困扰，在我国，患病率也在 5% - 6% 左右。它的临床表现多种多样，不孕、月经不调、肥胖、多毛、痤疮等问题常常接踵而至，不仅严重影响女性的生殖健康，还和代谢、内分泌以及心血管系统的异常紧密相关，比如长期的雌激素水平升高会增加子宫内膜癌和乳腺癌的风险，血脂异常和高胰岛素血症也会加重心血管负担，甚至可能发展成 2 型糖尿病。
在微观层面，PCOS 患者的卵巢中，卵泡的发育出现了异常，大量的小卵泡堆积，无法正常成熟和排卵，同时，颗粒细胞（Granulosa Cells，GCs）层变薄，这一系列变化背后的机制却一直没有完全弄清楚。近年来，微小 RNA（microRNAs，miRNAs）在各种疾病中的作用受到了广泛关注，miRNAs 是一类内源性的短链 RNA，虽然只有大约 20 - 24 个核苷酸，却能在基因表达调控中发挥关键作用。研究发现，PCOS 患者体内的 miRNA 表达谱和健康人存在差异，其中 miR-34a-5p 在 PCOS 患者的卵泡液（Follicular Fluid，FF）中表达升高，但它在 PCOS 的发生发展中究竟扮演着怎样的角色，尤其是对 GCs 的发育和功能有何影响，一直是个未解之谜。
为了揭开这些谜团，青岛大学附属医院生殖中心的研究人员开展了一项深入的研究，相关成果发表在《Journal of Ovarian Research》上。
研究人员首先收集了 2023 年 8 月至 10 月期间在医院接受体外受精 - 胚胎移植（In Vitro Fertilization and Embryo Transfer，IVF/ET）的患者的 FF、血清和 GCs 样本。根据修订的鹿特丹会议诊断标准，将患者分为 PCOS 组（19 例）和正常对照组（NC 组，20 例），同时排除了患有子宫内膜异位症、内分泌失调等其他疾病的患者。
接着，研究人员运用了多种实验技术来探究 miR-34a-5p 的作用机制。在细胞实验中，他们使用人颗粒细胞样肿瘤细胞系（KGN），通过转染 miR-34a-5p 模拟物、抑制剂和小干扰 RNA（siRNA）等，来改变细胞内 miR-34a-5p 的表达水平，然后利用 CCK8 实验检测细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞凋亡情况。为了确定 miR-34a-5p 的靶基因，研究人员借助生物信息学分析预测，并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证。此外，还运用了定量实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）和蛋白质免疫印迹法（Western blot）来检测基因和蛋白的表达水平。
在研究结果方面，研究人员发现，PCOS 患者血清和 FF 中的 miR-34a-5p 水平显著高于 NC 组，但在 GCs 中的表达却没有明显差异。ROC 曲线分析显示，血清 miR-34a-5p 对 PCOS 的诊断价值比 FF 更高。细胞实验表明，过表达 miR-34a-5p 会抑制 KGN 细胞的增殖，促进细胞凋亡；相反，抑制 miR-34a-5p 则会促进细胞增殖，减少细胞凋亡。进一步研究发现，miR-34a-5p 能够直接靶向 JAG1 基因的 3’非翻译区（3’UTR），抑制其表达。敲低 JAG1 基因的表达同样会抑制 KGN 细胞的增殖并诱导凋亡。
生物信息学分析和实验结果还显示，miR-34a-5p 的靶基因在 Notch 信号通路中显著富集。过表达 miR-34a-5p 会下调 Notch 信号通路中关键蛋白 JAG1、Notch1、NICD、Hes1 和 Hey1 的表达，表明 miR-34a-5p 可以通过抑制 Notch 信号通路来影响细胞的增殖和凋亡。同时，研究人员还发现，同时转染 miR-34a-5p 模拟物和 JAG1 激动剂能够部分逆转 miR-34a-5p 对细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用，进一步证实了 miR-34a-5p 是通过调节 JAG1/Notch 信号通路来影响 GCs 的功能。
总的来说，这项研究表明 miR-34a-5p 通过调节 JAG1/Notch 信号通路，影响了 GCs 的增殖和凋亡，进而在 PCOS 的发病机制中发挥重要作用。血清 miR-34a-5p 有望成为 PCOS 的诊断标志物，而 miR-34a-5p 也可能是治疗 PCOS 的潜在新靶点，为改善 PCOS 患者的生殖健康提供了新的方向。不过，研究也存在一些局限性，比如样本量较小，研究范围仅局限于成熟卵泡的 GCs，而且 JAG1 通路激动剂是否通过 Notch 信号通路特异性调节细胞增殖和凋亡还需要进一步研究，未来还需要更多的研究来深入探讨这些问题。
