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研究人员探究 miR-99a 对造血干 / 祖细胞（HSPCs）的影响，发现其促进增殖、抑制分化，或为白血病治疗带来新思路。
在人体的血液系统中，造血干细胞（Hematopoietic stem cells，HSCs）如同生命的 “种子”，源源不断地分化出各种血细胞，维持着血液系统的正常运转。然而，当这一精密的调控过程出现异常，白血病等血液疾病便可能乘虚而入。近年来，非编码 RNA 在血液疾病中的作用备受关注，其中 miR-99a 作为一类微小核糖核酸（MicroRNAs，miRNAs），其在白血病中的异常表达与不良预后相关，但其对正常造血的影响却尚不明确。为了深入了解 miR-99a 的 “真面目”，中国医学科学院血液病医院（中国医学科学院血液学研究所）等机构的研究人员展开了一项意义重大的研究，相关成果发表在《Scientific Reports》上。
在这项研究中，研究人员运用了多种关键技术方法。他们从健康足月新生儿的脐带血中获取造血干 / 祖细胞（Hematopoietic stem/progenitor cells，HSPCs），通过慢病毒载体转导技术，让 miR-99a 在细胞中过表达；利用集落形成细胞（Colony-forming cell，CFC）测定、长期培养起始细胞（Long-term culture-initiating cells，LTC-IC）测定等实验，评估细胞的增殖、自我更新和分化能力；借助生物信息学分析、双荧光素酶报告实验，探索 miR-99a 的作用机制和潜在靶点。
研究结果令人瞩目：
- miR-99a 加速 HSPCs 增殖：研究人员发现，与正常 HSPCs 相比，白血病干细胞中 miR-99a 表达显著上调。通过慢病毒载体使 miR-99a 在人脐带血 CD34+细胞中过表达后，细胞生长明显加速，处于 S 期的细胞比例增加，增殖指数显著高于对照组，且凋亡细胞更少。这表明 miR-99a 就像给 HSPCs 注入了一针 “兴奋剂”，让它们疯狂增殖。
- miR-99a 增强 HSPCs 自我更新能力：进一步研究发现，miR-99a 过表达能提高 LTC-IC 的频率，增加鹅卵石区域的大小和数量，在集落重铺实验中，后续轮次的集落形成能力也更强。这意味着 miR-99a 能帮助 HSPCs 更好地 “自我复制”，维持其干细胞特性。
- miR-99a 促进恶性 HSPCs 生长优势：在携带 JAK2V617F突变（一种常见的克隆造血相关突变）的小鼠模型中，过表达 miR-99a 的 c-Kit 细胞在后续轮次的集落形成实验中产生更多菌落，c-Kit 细胞比例也显著增加。这说明 miR-99a 能为恶性克隆提供生长优势，推动白血病的发展。
- miR-99a 阻碍髓系成熟和红系发育：在 CFC 实验和流式细胞术分析中，miR-99a 过表达使 CFU-GEMM 和 CFU-GM 集落数量增加，CFU-E 计数减少，髓系细胞成熟标记物（CD13+CD11b+）比例降低；在红系分化实验中，miR-99a 过表达减缓了红系分化进程，使早期红系分化细胞比例增加，去核红细胞比例下降。这表明 miR-99a 就像一个 “路障”，阻碍了 HSPCs 向成熟血细胞的分化。
- miR-99a 提高 CD34+细胞体内移植能力：将过表达 miR-99a 的 CD34+细胞移植到 NOG 小鼠体内，16 周后发现，miR-99a 组小鼠外周血和骨髓中人类 CD34+细胞比例显著高于对照组，说明 miR-99a 能显著提高 CD34+细胞在体内的植入能力。
- miR-99a 影响 CD34+细胞转录谱：转录组测序分析发现，miR-99a 过表达导致 547 个基因差异表达，基因集富集分析（Gene Set Enrichment Analysis，GSEA）显示，与 HSCs、造血分化、E2F 靶点和 WNT 信号相关的基因集上调，且与多种恶性肿瘤相关。这揭示了 miR-99a 影响 HSPCs 功能的潜在分子机制。
- miR-99a 通过靶向 NIPBL 调控 HSPCs：通过综合分析，研究人员确定 NIPBL 是 miR-99a 的直接靶点。双荧光素酶报告实验证实了这一点，干扰 NIPBL 表达后，HSPCs 表现出与 miR-99a 过表达相似的表型，即抑制分化。
在讨论部分，研究人员指出，在生理状态下，造血细胞的自我更新和分化受到严格调控，而 miR-99a 过表达打破了这种平衡，促进 HSPCs 增殖和克隆形成，抑制其分化，这些变化与肿瘤进展密切相关。虽然过表达 miR-99a 不足以直接诱导白血病转化，但在携带 JAK2V617F突变的背景下，能促进恶性克隆生长。这表明 miR-99a 在白血病发生发展过程中扮演着重要角色，靶向 miR-99a 或 NIPBL 可能为血液恶性肿瘤的治疗开辟新途径。
总的来说，这项研究揭示了 miR-99a 在调控 HSPCs 中的关键作用，为理解正常和恶性造血过程提供了新的视角，也为未来开发针对血液疾病，尤其是白血病的精准治疗策略奠定了坚实基础。相信在不久的将来，随着对 miR-99a 研究的不断深入，人类在攻克白血病等血液疾病的道路上会取得更大的突破。
