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为明确青海西宁野蔷薇（Rosa multiflora Thunb）黑霉病的病原菌，研究人员开展了病原菌鉴定及致病性研究。通过形态学和多基因（ITS、TEF1-α、TUB2、HIS3、CAL）测序分析，确定病原菌为茶藨子葡萄座腔菌（D. eres）。该研究首次报道其对野蔷薇的致病性，对青藏高原生态保护意义重大。
在美丽的青藏高原边缘，青海西宁的野蔷薇正遭受一场神秘病害的侵袭。野蔷薇作为一种野生灌木，在保持水土、防风固沙方面发挥着重要作用。然而在 2022 年 8 月，西宁的 5 年生野蔷薇出现了严重的黑霉病疫情，患病植株的果实部分腐烂变黄，表面附着大量黑色粉末，叶片也逐渐枯黄，布满黑色斑点，在 3 公顷的调查区域内，黑霉病发病率高达 90% 。这种病害不仅影响了野蔷薇的生长和繁殖，还可能对当地的生态平衡造成潜在威胁。为了找出导致野蔷薇生病的 “真凶”，并探索有效的防治方法，青海大学农林科学院、青海省农业害虫综合治理重点实验室的研究人员展开了深入研究。他们的研究成果发表在《Australasian Plant Pathology》杂志上，为我们揭示了这场植物病害背后的秘密。
研究人员在开展研究时，主要运用了以下几种关键技术方法：首先是样本采集与病原菌分离技术，从患病野蔷薇的果实和叶片上随机采集样本，选取病健组织交界处的组织块进行消毒处理，在改良马丁培养基上进行培养，从而获得真菌菌株；其次是形态学观察技术，对分离得到的菌株进行多次传代培养后，仔细观察其菌落形态、颜色以及分生孢子的形状、大小等特征；最后是分子生物学技术，提取菌株的基因组 DNA，扩增并测序 ITS、TEF1-α、TUB2、HIS3 和 CAL 基因，通过序列比对和构建系统发育树来确定病原菌的种类。
研究结果：
- 病原菌分离与初步筛选：研究人员从患病的果实和叶片中分别分离出 7 株和 5 株真菌菌株。经过初步的柯赫氏法则（Koch’s postulates）验证实验，发现只有从果实中分离得到的 YQW-1-4 菌株具有致病性，后续研究便围绕该菌株展开。
- 病原菌形态学特征：YQW-1-4 菌株在培养基上生长时，呈现出棉花状的气生菌丝，菌落边缘为白色，中心有深色色素积累。成熟后，可见棕色和黑色的分生孢子，同时伴有透明、乳白色或黄色的分泌物。其中，α 分生孢子呈梭形或椭圆形，两端开口较大，大小为 (8.84 ± 0.54)μm×(2.22 ± 0.23)μm；β 分生孢子呈线形，弯曲，基部近截形，两侧逐渐变细。
- 病原菌分子生物学鉴定：对 YQW-1-4 菌株的 ITS、TEF1-α、TUB2、HIS3 和 CAL 基因进行扩增和测序。BLAST 比对结果显示，这些基因序列与茶藨子葡萄座腔菌（Diaporthe eres）Nitschke（OR858973.1）的同源性分别为 99.49%（580/583 碱基对）、98.66%（368/373 碱基对）、99.22%（512/516 碱基对）、98.99%（489/494 碱基对）和 98.84%（511/517 碱基对）。利用 MEGA7.0 软件中的最大似然法构建系统发育树，结果表明 YQW-1-4 菌株与 D. eres CNUCC201907 菌株聚在同一进化分支上，自展值为 73%。综合形态学和分子生物学特征，确定 YQW-1-4 菌株为茶藨子葡萄座腔菌（D. eres）。
- 病原菌致病性测定：研究人员采用刺伤和非损伤接种两种方式，对 YQW-1-4 菌株的致病性进行测定。将培养 3 - 5 天的菌株制成琼脂圆盘和分生孢子悬浮液，接种到健康野蔷薇植株的叶片和果实上，以喷洒等量蒸馏水的植株作为对照。接种 7 天后，叶片逐渐失绿，黑斑增多；15 天后，果实上出现突起的孢子，开始逐渐膨大。从患病组织中重新分离出病原菌，其菌落形态特征和分子生物学（ITS、TEF1-α、TUB2、HIS3 和 CAL 基因）特征与 YQW-1-4 菌株相似，符合柯赫氏法则，进一步证实了茶藨子葡萄座腔菌（D. eres）是导致野蔷薇黑霉病的病原菌。
研究结论和讨论：这项研究首次在中国以及全球范围内报道了茶藨子葡萄座腔菌（D. eres）对野蔷薇的致病性。这一发现对于进一步保护青藏高原的生态屏障具有重要意义。野蔷薇作为当地生态系统的重要组成部分，其健康状况直接关系到生态平衡和生物多样性。了解茶藨子葡萄座腔菌（D. eres）的致病机制和传播途径，有助于制定针对性的防治策略，减少黑霉病对野蔷薇的危害，从而维护当地生态系统的稳定。此外，该研究也为其他植物病害的研究提供了参考和借鉴，推动了植物病理学领域的发展。未来，研究人员可以进一步深入研究茶藨子葡萄座腔菌（D. eres）的致病机理，探索更加有效的防治方法，为保护野生植物资源和生态环境做出更大的贡献。
