苯扎氯铵对人角膜缘干细胞毒性效应的评估及其对角膜再生潜能的影响

编辑推荐：为解决BAC(苯扎氯铵)防腐剂在眼药水中长期使用导致的角膜缘干细胞(LESCs)毒性问题，波兰西里西亚医科大学团队通过体外实验证实0.0002% BAC可显著抑制LSCs增殖与迁移，降低克隆形成能力并诱导凋亡相关基因表达，为开发无防腐剂眼药水提供理论依据。

　　 在眼科临床实践中，眼药水是治疗青光眼、干燥综合征等疾病的常用制剂，而其中添加的防腐剂苯扎氯铵(BAC)虽能防止微生物污染，却可能引发医源性干眼症(DED)和角膜损伤。角膜上皮的再生依赖于角膜缘上皮干细胞(LESCs)的自我更新与分化能力，但长期暴露于BAC是否直接损害这一关键细胞群体尚缺乏系统研究。这一科学问题由波兰西里西亚医科大学组织学与胚胎学系的Agnieszka Prusek团队在《Scientific Reports》发表的最新研究中给出了答案。

研究团队采用MTT法、克隆形成实验、划痕实验、RT-qPCR和流式细胞术等关键技术，利用临床废弃的角膜巩膜缘组织分离培养人类LSCs，模拟长期用药场景进行48小时BAC暴露实验。

LSC特性鉴定：通过ABCG2和TP63阳性标记及KRT3/KRT12阴性表达确认干细胞特性，流式检测显示细胞群同时存在上皮和间充质特征。 BAC剂量效应：0.0002% BAC即可使细胞活力下降31.9%，更高浓度导致近乎完全死亡。 功能损伤：BAC处理组完全丧失形成holoclone（高增殖潜能克隆）的能力，划痕实验显示迁移速率显著降低。 分子机制：上调促凋亡基因BAX/CASP3/CASP7，下调抗凋亡BCL2；细胞周期调控基因RB1/CDKN2C表达升高而E2F2降低，但流式未显示周期相位改变。 炎症反应：虽IL1β表达升高，但NLRP3炎症小体通路未显著激活，MMP3/9表达无变化。

结论指出，BAC在远低于临床眼药水浓度(0.005-0.02%)的0.0002%水平即能通过抑制增殖、诱导凋亡削弱LSCs再生潜能，但未引发典型炎症反应。这一发现为解释BAC相关角膜病变提供了干细胞层面的机制证据，强调开发无防腐剂制剂或新型角膜保护策略的紧迫性。研究首次建立人源LSCs-BAC毒性模型，为后续药物筛选奠定基础。