树舌灵芝中高氧化羊毛脂烷三萜的发现及其通过TGF-β/Smad通路抑制肝纤维化的机制研究

本研究针对临床缺乏有效抗肝纤维化药物的现状，对树舌灵芝(Ganoderma applanatum)乙酸乙酯提取物进行系统研究，分离鉴定出11个羊毛脂烷三萜（含10个新化合物），其中applanoids J/K首次揭示具有B-seco-1,4-环己二酮新骨架。通过TGF-β1诱导的肝纤维化模型证实化合物2/4/6/7/10能显著抑制FN、α-SMA(ACTA2)和COL1A1等纤维化标志基因表达，并首次阐明化合物7通过阻断TGF-β/Smad信号通路发挥作用，为抗肝纤维化药物研发提供了新候选分子。

　　

肝纤维化作为慢性肝损伤的病理结局，其核心特征是肝星状细胞(HSCs)活化导致的细胞外基质(ECM)过度沉积。当TGF-β等促纤维化因子持续刺激时，静止态HSCs(qHSCs)会转化为肌成纤维细胞，过量分泌α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(COL1A1)和纤维连接蛋白(FN)，最终形成不可逆的纤维瘢痕。尽管这一过程可能进展为肝硬化甚至肝癌，但临床上仍缺乏特异性靶向药物。

传统药用真菌灵芝属(Ganoderma)富含结构多样的三萜类化合物(GTs)，前期研究发现其可通过调控NF-κB和TGF-β1/Smads通路发挥抗纤维化作用。特别是树舌灵芝中分离的甲基applaniate A等成分能抑制HSCs增殖，但其具体活性成分与作用机制尚不明确。为此，研究人员系统研究了树舌灵芝乙酸乙酯提取物，论文发表在《Bioorganic Chemistry》。

研究采用硅胶柱层析、半制备HPLC等技术分离纯化化合物，通过紫外(UV)、红外(IR)、高分辨质谱(HRESIMS)及核磁共振(1D/2D NMR)等技术解析结构，并利用TGF-β1诱导的肝纤维化细胞模型评估活性，结合Western blot和免疫荧光探讨机制。

General experimental procedures
通过自动旋光仪、紫外分光光度计等设备测定物理常数，Bruker 600/800 MHz核磁共振仪采集数据，Q-TOF质谱确定分子量，为结构鉴定提供基础数据。

Results and discussion
从树舌灵芝中分离获得11个高度氧化的羊毛脂烷三萜(1-11)，包括10个新化合物。其中applanoid J(1)的HRESIMS显示分子式C₃₀H₄₀O₁₀，¹H NMR检测到7个甲基信号及烯烃质子，其B环开裂形成1,4-环己二酮的创新结构经2D NMR确证。活性评价显示化合物2/4/6/7/10显著下调FN、ACTA2(编码α-SMA)和COL1A1表达，其中化合物7能特异性抑制TGF-β/Smad通路关键蛋白磷酸化。

Conclusions
该研究首次报道了具有B-seco-1,4-环己二酮骨架的新型GTs，拓展了灵芝三萜的结构多样性。机制研究表明这些高氧化三萜可通过多靶点干预HSCs活化，特别是化合物7对TGF-β/Smad通路的抑制作用，为开发靶向抗肝纤维化药物提供了先导化合物。研究成果不仅丰富了天然药物化学库，也为肝纤维化的病理机制研究提供了新视角。