单细胞解析揭示人类血栓中的免疫溶栓轴：NR4A1hi单核细胞与低氧诱导的PLAUR+中性粒细胞协同促进血栓消退

这篇研究通过单细胞多组学技术（scRNA-seq/CITE-seq）首次绘制了人类血栓的免疫细胞图谱，揭示了非经典单核细胞（NR4A1hi CD16hi）通过CXCL8-CXCR1/2轴持续招募中性粒细胞，后者在低氧微环境中分化为具有溶栓特性（PLAUR+ VEGFAhi）的亚群，提出"免疫溶栓"（immunothrombolysis）新概念，为心脑血管疾病治疗提供新靶点。

　　

研究背景

血栓性疾病是全球致残致死的主因，传统抗栓治疗存在出血风险。近年研究发现炎症与血栓形成（thromboinflammation）密切相关，但人类血栓的免疫细胞动态图谱尚未阐明。本研究通过单细胞测序技术解析卒中患者血栓微环境，发现先天免疫细胞在血栓消退中的关键作用。

研究设计

团队收集32例卒中患者的血栓及配对血液样本，采用流式细胞术、单细胞RNA测序（scRNA-seq）和表观转录组测序（CITE-seq）进行多组学分析，并通过小鼠下腔静脉狭窄模型和体外血栓实验验证机制。

核心发现

1. 血栓免疫微环境特征
流式分析显示血栓中中性粒细胞（CD15⁺ SSC^hi/SSC^lo）和单核细胞显著富集。单细胞测序鉴定出13个中性粒细胞亚群，其中VEGFA^hi cluster 2为血栓特异性亚群，高表达尿激酶（PLAU）和低氧相关基因HIF1A-AS3。

2. 低氧诱导的溶栓表型
血栓中性粒细胞（tNeutro）呈现CD16^lo转化，体外实验证实低氧模拟剂roxadustat可诱导类似表型。基因敲除实验显示，髓系细胞HIF1α缺失会减少血栓中PLAUR⁺中性粒细胞并加重血栓形成。

3. 单核细胞驱动的中性粒细胞招募
血栓单核细胞（tMono）呈现非经典特征（NR4A1^hi CD16^hi），高表达CXCL8等趋化因子。小鼠命运示踪实验证实，血栓形成48小时后仍有新中性粒细胞持续浸润，该过程依赖NR4A1⁺单核细胞。

4. 跨物种验证的免疫溶栓轴
人和小鼠血栓单核细胞均通过CXCL8-CXCR1/2轴招募中性粒细胞。抑制该通路（如reparixin处理）或敲除Nr4a1均会减少中性粒细胞浸润并延缓血栓消退。

机制模型

血栓微环境诱导单核细胞向NR4A1^hi表型转化→分泌CXCL8招募循环中性粒细胞→低氧触发中性粒细胞分化为PLAUR⁺ VEGFA^hi亚群→通过尿激酶系统和血管生成促进血栓溶解。

研究意义

该研究首次提出"免疫溶栓"概念，揭示先天免疫细胞在血栓消退中的双刃剑作用，为开发靶向免疫调节的抗栓策略奠定理论基础。单细胞数据集为血栓研究提供宝贵资源，NR4A1-HIF1α-PLAUR通路可能成为治疗心梗、卒中的新靶点。