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本文聚焦鼻咽癌（NPC）的过继细胞疗法（ACT），研究发现肿瘤浸润双阴性调节性 T 细胞（DN TILs）频率与 TIL-ACT 疗效相关，其通过 Fas-FasL、TGF-β 和 IL-10 信号限制 CD8+ TIL 扩增。此外，还确定了相关基因特征和预后基因，为精准治疗提供方向。
研究背景
过继细胞疗法（ACT）使用体外扩增的肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）治疗实体瘤，但仅少数患者能从 TIL-ACT 中获得长期益处，识别可能受益的患者仍是挑战。鼻咽癌（NPC）与 EB 病毒（EBV）感染密切相关，是癌症免疫治疗的良好模型。此前在 NPC 患者中进行的 TIL-ACT 研究，有的显示有临床反应和免疫增强，但有的未获得显著生存益处。本研究旨在筛选预测 TIL-ACT 临床结果的生物标志物，并探究其潜在分子机制。
研究方法
- 样本采集与处理：从 NPC 患者获取肿瘤组织和 TIL 输注产品，部分患者进行同步放化疗（CCRT）加 TIL-ACT，部分仅进行 CCRT。对 62 个肿瘤样本进行批量 RNA 测序，47 个 TIL 输注产品进行流式细胞术分析，26 个 TIL 输注产品进行单细胞（sc）RNA 测序。
- 实验技术与分析方法：利用多种软件和算法进行单细胞聚类分析、细胞类型注释、差异基因表达分析等。通过细胞 - 细胞相互作用分析、功能富集分析等探究细胞间关系和基因功能。进行体外实验，如增殖抑制试验、细胞毒性试验等，验证细胞功能。
研究结果
- T 细胞多样性与 TIL 输注产品的结果相关性：通过单细胞 RNA 测序，在 TIL 输注产品的 T 细胞中鉴定出 14 个细胞簇，包括 11 个 CD3+CD8+ T 细胞簇、2 个 CD3+CD4+ T 细胞簇和 1 个 CD3+CD8?CD4?双阴性（DN）T 细胞簇（即 DN TILs）。DN TILs 在疾病进展患者中的频率显著高于非进展患者，其频率较低与患者较好的无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）相关。
- NPC 中 DN TILs 的转录组特征、起源和组成：NPC 患者外周血中 CD3+CD8?CD4?（DN）T 细胞频率高于健康供体。DN TILs 表现出激活的调节性 T 细胞（Tregs）样表型，表达多种相关基因和细胞因子。其可能主要起源于 T 细胞发育的双阳性（DP）或单阳性（SP）阶段，大部分 TCRαβ 阳性的 DN TILs 来自肿瘤微环境（TME）中的 CD4+和 CD8+ T 细胞。DN TILs 可分为六个亚群，其中 CD56?IKZF2+（DN）TILs 与患者不良预后相关。
- CD8+ TIL 亚群与 DN TILs 和 TIL-ACT 结果的关系：细胞 - 细胞通讯分析表明，DN TILs 通过 TGF-β、IL-10 和 Fas/Fas 配体（FasL）信号通路与 CD4+和 CD8+ TIL 亚群相互作用。DN TILs 可抑制 CD4+和 CD8+ T 细胞增殖，限制 CD8+ TIL 的扩增和抗肿瘤活性。不同的 CD8+ TIL 亚群对 TIL-ACT 结果有不同影响，部分增殖能力强的亚群与较好预后相关，而部分功能耗竭的亚群与较差预后相关。
- 基线 TME 转录组特征与 TIL-ACT 结果及 TIL 输注产品组成的关联：对 62 个预处理 NPC 组织的基因表达谱分析发现，自然杀伤（NK）细胞、主要组织相容性复合体（MHC）II 类等 9 种基因特征与 CCRT 加 TIL-ACT 患者的 PFS 相关。这些基因特征还与 TIL 输注产品中 TIL 亚群的频率相关，表明 TME 转录组影响 TIL-ACT 结果和 TIL 亚群组成。
- 鉴定具有 TIL-ACT 预后价值的 14 个细胞内 T 细胞基因：通过比较非进展和进展患者 TIL 输注产品中的差异表达基因，鉴定出 14 个与 TIL-ACT 预后相关的基因。其中 13 个基因与较好的 PFS 和 OS 相关，且在与良好预后相关的 CD8+ TIL 簇中高表达；TNFRSF18 基因与较差的 OS 相关，在 DN TIL 簇中高表达。
研究讨论
本研究发现 DN TILs 和 CD8+ TIL 簇的频率与 TIL-ACT 结果相关。DN TILs 具有激活的 Tregs 样表型，阻碍 TIL-ACT 的临床疗效，而 CD8+ TILs 则有益。TME 转录组可预测 TIL-ACT 结果并影响 TIL 输注产品组成。此外，确定的 14 个细胞内 T 细胞基因可能作为优化 TIL-ACT 的潜在靶点。不过，本研究存在局限性，如为单中心回顾性研究，DN TILs 功能验证受限，其在 TME 中的调节机制及与 EBV 抗原基因表达的关系未深入探究。但该研究为识别适合 TIL-ACT 的 NPC 患者和提高治疗效果提供了方向。
