新型肝片形吸虫疫苗候选物在绵羊中的保护效果评估：基于新脱囊幼虫抗原的多靶点策略

为解决肝片形吸虫(Fasciola hepatica)抗药性加剧及化学残留问题，西班牙科尔多瓦大学团队通过蛋白质组学筛选出4种新脱囊幼虫(NEJs)抗原(KTSPIDP/VGHC1/CRTA/CAL)，开发多抗原疫苗。研究显示，尽管疫苗未能降低虫体负荷和粪卵计数，但显著减轻了肝脏病理损伤，为靶向早期感染阶段的疫苗设计提供了新思路。

　　

肝片形吸虫病是全球畜牧业和公共卫生的重大威胁，这种寄生虫每年造成25亿欧元的经济损失，且抗药性问题日益严重。传统药物如三氯苯达唑的效力逐渐下降，而现有疫苗研发因寄生虫复杂的免疫逃逸机制屡屡受挫。面对这一困境，西班牙科尔多瓦大学联合萨拉曼卡高等科学研究委员会的研究团队另辟蹊径，将目光投向寄生虫生命周期的关键薄弱环节——新脱囊幼虫(NEJs)阶段。这项发表在《Scientific Reports》的研究，首次评估了基于NEJs阶段多靶点抗原的疫苗在绵羊中的保护效果，为突破肝片形吸虫疫苗研发瓶颈提供了重要数据。

研究团队运用小鼠肠道上皮细胞与NEJs共培养模型结合iTRAQ定量蛋白质组学技术，筛选出4种在宿主-寄生虫界面高表达的抗原：Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(KTSPIDP)、电压门控氢通道(VGHC1)、胆囊收缩素受体A型(CRTA)和α-连环蛋白类似物(CAL)。这些靶点分别参与寄生虫入侵、pH调节、信号传导和细胞黏附等关键过程。通过大肠杆菌表达重组蛋白，配合Montanide 61 VG佐剂制成疫苗，在绵羊感染模型中进行双剂量免疫评估。

结果部分
寄生虫学结果
疫苗接种组(G1)与感染对照组(G3)的虫体负荷(66.6 vs 57.8)和粪卵计数(2216.2 vs 2087.5 EPG)无显著差异，但G1组成虫体型更大(21.7×9.7 mm vs 17.5×8.8 mm)，提示疫苗可能影响寄生虫营养摄取。

体液免疫反应
所有抗原均诱导显著IgG1反应，其中CRTA同时激发较强IgG2响应。KTSPIDP的抗体滴度在免疫后8周达峰(p<0.001)，VGHC1和CAL则持续至感染后4周。但感染未引发抗体二次升高，提示重组抗原可能缺乏天然构象表位。

病理学结果
疫苗接种使肝脏瘢痕数量(2.1 vs 3.9，p<0.01)和胆管增厚程度(2.5 vs 2.7，p<0.05)显著降低，总病变评分减少31.7%(6.9 vs 10.1)。组织学显示G1组肝左叶萎缩更轻微，纤维性肝周炎发生率更低。

讨论与意义
这项研究揭示了NEJs阶段多抗原疫苗的双重特性：虽未能阻断寄生虫定植，但通过调节宿主免疫显著减轻组织损伤。这种"病理保护而非灭菌免疫"的现象可能与Th2型优势应答(IgG1>IgG2)有关，也反映了肝片形吸虫在进化中形成的复杂免疫调节策略。值得注意的是，疫苗组虫体尺寸增大可能与代谢补偿机制相关，这为研究寄生虫营养获取途径提供了新线索。

该研究的创新性在于：首次将CRTA等神经内分泌靶点纳入疫苗设计；证实早期干预可改变寄生虫迁移动力学；建立的NEJs-肠上皮互作模型为后续抗原筛选提供了标准化平台。尽管真核表达系统可能更利于保留天然抗原表位，但本研究确立的病理改善指标为疫苗疗效评估提供了新维度，对开发针对其他组织迁移性寄生虫的联合防控策略具有重要借鉴价值。