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为解析大豆种子含油量(OC)遗传机制,研究人员利用四交重组自交系(FWRIL)群体,通过多基因座全基因组关联分析(GWAS)等方法,鉴定出 54 个 QTN,筛选出 Glyma.18G027100 和 Glyma.03G021800 候选基因,为高油大豆分子育种提供依据。
大豆作为全球第二大植物油来源,其种子含油量(Oil Content, OC)是育种的核心目标之一。然而,OC 属于受多基因和环境共同调控的数量性状,挖掘稳定遗传位点和关键基因一直是研究难点。此前虽已在 SoyBase 数据库中记录了 315 个 QTL 和 93 个 QTN,但部分位点的环境稳定性不足,且候选基因的功能验证仍需深入。为突破这些瓶颈,东北农业大学联合盐城工学院、南京农业大学等机构的研究人员,开展了一项系统性研究,相关成果发表在《Scientific Reports》。
研究团队以(垦丰 14× 垦丰 15)×(垦丰 19× 黑农 48)构建的 144 份四交重组自交系(Four-way Recombinant Inbred Line, FWRIL)群体为材料,在 10 个环境中进行表型数据采集,并结合 109,676 个非冗余单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism, SNP)标记的基因型数据,采用 pLARmEB、ISIS EM-BLASSO 等 5 种多基因座 GWAS 方法,鉴定控制 OC 的数量性状核苷酸(Quantitative Trait Nucleotide, QTN)。
研究主要采用以下技术方法:①表型分析:通过近红外分析仪测定种子 OC,结合 SAS 软件进行方差分析(ANOVA)和广义遗传力(h2)计算;②基因分型:利用 SoySNP660K BeadChip 进行 SNP 标记检测,经质量过滤后用于 GWAS;③转录组测序:选取高油品种 KS01、KD31 和低油品种 KD48、KD57 的种子发育中期样本,进行 RNA-seq 分析,筛选差异表达基因(Differentially Expressed Genes, DEGs);④单倍型分析:基于 141 份大豆种质的基因型数据,利用 Haploview 软件构建候选基因的单倍型,并分析其与 OC 的关联。
结果分析
表型变异与遗传力
在 10 个环境中,亲本 OC 表现为垦丰 14、垦丰 15 高于垦丰 19、黑农 48,FWRIL 群体 OC 变异范围为 16.71%-24.11%,变异系数(CV)3.07%-5.59%,偏度和峰度绝对值均小于 1,Shapiro-Wilk 检验显示 OC 呈正态分布,表明其受多基因调控。方差分析表明基因型、环境及其互作均显著影响 OC,广义遗传力为 0.65,提示存在稳定遗传组分。
QTN 鉴定
5 种 GWAS 方法共检测到 54 个显著 QTN,分布于 19 条染色体(Chr09 最多,9 个;Chr12 未检测到)。其中,21 个 QTN 被多种方法重复检测,2 个 QTN(qOC-7-1、qOC-18-1)在 2 个环境中稳定表达,贡献率(PVE)5.52%-9.20%。23 个共有 QTN 中,12 个为新发现位点,如 qOC-1-3、qOC-16-4 等。
候选基因筛选
在 QTN 的连锁不平衡(LD)衰减区域(200kb)内,结合转录组数据和 KEGG 通路分析,从 441 个基因中筛选出 13 个与油脂代谢相关的 DEGs。加权基因共表达网络分析(WGCNA)显示,Glyma.18G027100 和 Glyma.03G021800 与 OC 显著相关。单倍型分析表明,Glyma.18G027100 的 Hap1(TAACACAT)和 Glyma.03G021800 的 Hap1(AGGA)均与高 OC 显著关联,前者频率 82%,后者频率 51%,验证其作为候选基因的可靠性。
基因功能预测
Glyma.18G027100 编码磷脂酰肌醇磷脂酶 Cδ(PLCδ),属于 PLC 基因家族,参与脂质代谢(GO:0006629),虽在拟南芥中已证实与酰基脂质代谢相关,但在大豆中首次被报道。Glyma.03G021800 编码含 CHCH 结构域的 NADH - 泛醌氧化还原酶,参与线粒体氧化磷酸化(GO:0042775),其通过调控 ATP 合成影响脂肪酸延伸,为油脂合成的能量代谢关键环节。
结论与意义
本研究通过多方法整合分析,系统解析了大豆 OC 的遗传基础,鉴定出 54 个 QTN(含 12 个新位点)及 2 个关键候选基因。其中,qOC-18-1 位点的 AX-157,333,937 标记同时影响蛋白含量(Protein Content, PC)和 OC,且呈负相关,为大豆品质性状的协同改良提供了新靶点。候选基因 Glyma.18G027100 和 Glyma.03G021800 分别通过磷脂代谢和能量代谢调控 OC,不仅拓展了大豆油脂合成的分子机制认知,也为分子标记辅助选择(Marker-assisted Selection, MAS)培育高油品种提供了直接工具。研究中建立的多组学联合分析策略,为复杂数量性状的遗传解析提供了可借鉴的技术范式,有助于加速作物遗传改良进程。