基于性别差异的北大西洋蓝蟹细胞外与细胞内免疫参数评估及其生物学意义

推荐 为解决甲壳动物免疫研究不足及性别差异对免疫反应的影响问题，研究人员以北大西洋蓝蟹（Callinectes sapidus）为对象，比较了细胞外液（CFH）和血细胞裂解上清液（HLS）中免疫酶活性及杀菌能力的性别差异。结果显示，HLS中酚氧化酶等活性显著高于CFH，且雌性溶菌酶活性更高。研究为甲壳动物免疫学研究和养殖性别选择提供了重要数据支撑。

　　

论文解读
北大西洋蓝蟹（Callinectes sapidus）作为具有重要经济和生态价值的甲壳动物，近年来因过度捕捞导致资源锐减，其人工养殖潜力备受关注。然而，甲壳动物的免疫系统与脊椎动物存在显著差异，缺乏适应性免疫机制，主要依赖先天免疫应答。目前关于蓝蟹免疫参数的研究较少，尤其是性别差异对免疫反应的影响尚未明确。本研究旨在评估蓝蟹细胞外液（Cell-free haemolymph, CFH）和血细胞裂解上清液（Haemocyte lysate supernatant, HLS）中免疫相关酶活性及杀菌能力的性别差异，为甲壳动物免疫学研究和养殖实践提供理论依据。

为开展此项研究，西班牙穆尔西亚大学的研究团队从当地渔市获取了10只雄性和10只雌性成年蓝蟹，体质量约为315±75克。实验动物在严格控制的条件下隔离检疫15天后，采集血淋巴并分离CFH和HLS样本，分别测定多种免疫相关酶活性及对致病菌的杀菌能力。

研究结果表明，CFH中的蛋白质浓度显著高于HLS。以毫克蛋白为单位时，酚氧化酶（Phenoloxidase, PO）和酯酶（Esterase）活性在两种性别中均表现为HLS高于CFH；而溶菌酶（Lysozyme）和磷酸酶（Phosphatase）活性仅在雌性中呈现相同趋势。雌性HLS中的溶菌酶活性显著高于雄性。若以血淋巴体积为单位，雄性和雌性的溶菌酶活性在CFH中均高于HLS，而PO和酯酶活性则在HLS中更高，其中雄性HLS的PO活性存在性别差异。值得注意的是，雄性CFH中未检测到碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase, ALP）活性。

在杀菌能力方面，HLS对弧菌（Vibrio harveyi、V. alginolyticus、V. anguillarum）和美人鱼发光杆菌（Photobacterium damselae）的杀菌活性均显著强于CFH，且雌性HLS对V. alginolyticus、V. anguillarum和P. damselae的杀菌能力更强。雄性CFH对V. alginolyticus和P. damselae的杀菌活性则高于雌性。

讨论部分指出，甲壳动物作为无脊椎动物，其免疫系统缺乏适应性记忆功能，但血细胞和血浆中的免疫酶在抵御病原体中发挥关键作用。本研究首次系统比较了蓝蟹CFH和HLS中免疫酶活性的性别差异，发现HLS更适合评估多数免疫酶活性，而CFH在溶菌酶和ALP活性检测中具有独特价值。雌性蓝蟹HLS免疫活性普遍较高，可能与繁殖期生理负担相关，提示未来研究中需考虑性别因素。此外，ALP活性缺失可能反映雄性CFH的特定代谢特征。

本研究为甲壳动物免疫学研究提供了基线数据，证实了HLS在免疫酶活性评估中的优势，并强调了性别差异对免疫反应的影响。这些发现对优化蓝蟹人工养殖条件、提高抗病能力及制定性别特异性管理策略具有重要意义。

研究方法
研究人员采用血淋巴分离技术获取CFH和HLS样本，通过分光光度法测定PO、酯酶、溶菌酶、磷酸酶和ALP活性，并利用平板计数法评估对四种致病菌的杀菌能力。实验动物来自西班牙穆尔西亚当地渔市，饲养条件严格控制在20±2°C水温及循环海水环境中。