Ephrin-A5/EphA7信号通路通过非经典互作抑制横纹肌肉瘤增殖的机制研究

本研究针对横纹肌肉瘤(RMS)现有疗法局限性的问题，通过探究Eph受体酪氨酸激酶家族成员EphA7及其配体ephrin-A5在RMS中的作用机制，发现两种分子Fc嵌合体均可通过非经典互作（ephrin-A5-EphA8/EphA7-ephrin-A2）显著抑制RMS细胞增殖并促进分化。该研究为RMS分化治疗提供了新靶点，发表于《Skeletal Muscle》。

　　

横纹肌肉瘤(RMS)作为儿童最常见的软组织肉瘤，其治疗困境始终是肿瘤学领域的重大挑战。尽管60%的局部病例可通过手术和化疗控制，但转移性患者五年生存率骤降至33%。更棘手的是，现有疗法缺乏靶向性，尤其对更具侵袭性的肺泡型(ARMS/FP，携带PAX3/7-FOXO1融合基因)效果有限。这种困境促使科学家将目光投向分化治疗——通过诱导肿瘤细胞退出细胞周期进入终末分化状态来遏制其恶性增殖。然而，如何找到能特异性触发RMS细胞分化程序的分子开关，成为领域内亟待解决的核心问题。

密苏里大学的研究团队另辟蹊径，从骨骼肌发育的关键调控因子Eph受体家族入手。Eph作为最大的受体酪氨酸激酶(RTK)家族，其与ephrin配体的双向信号系统在组织形态发生和细胞命运决定中扮演关键角色。课题组前期发现，在正常肌生成过程中，分化肌细胞表面的EphA7可通过结合前体细胞表面的ephrin-A5驱动集体分化。这一发现自然引出一个关键假设：能否利用EphA7-ephrin-A5轴迫使RMS细胞"改邪归正"？

研究采用三种人源RMS细胞系（Rh41/Rh30代表ARMS/FP型，RD代表ERMS/FN型）进行系统验证。通过Fc嵌合体功能化培养表面、免疫荧光定量分析、siRNA基因沉默等技术手段，揭示了令人意外的发现：虽然EphA7-Fc确实能抑制RMS增殖，但ephrin-A5-Fc效果更显著。深入机制研究表明，这种反常现象源于RMS细胞中Eph/ephrin表达谱的异常——正常肌生成中的"黄金搭档"EphA7-ephrin-A5在RMS中发生路径重构，转而通过ephrin-A5-EphA8和EphA7-ephrin-A2这两对非经典组合发挥作用。

EphA7-Fc和ephrin-A5-Fc处理抑制hRMS细胞增殖并促进分化和细胞周期退出
功能实验显示，两种Fc嵌合体处理均能显著降低所有测试细胞系的增殖标志物Ki67表达，其中ephrin-A5-Fc在120小时处理时效果尤为突出。同时，终末分化标志物肌球蛋白重链(MyHC)在ERMS/FN型RD细胞中显著上调，而细胞周期抑制蛋白p21在ARMS/FP型细胞中明显增加。这些数据首次证实Eph/ephrin信号可同时调控RMS的增殖阻滞和分化诱导。

hRMS细胞中EphA7和ephrin-A5的表达和定位与真正的成肌细胞不同
通过免疫定位和Western blot分析，研究揭示了RMS细胞的分子异质性：EphA7在ARMS/FP细胞中异常定位于高尔基体而非细胞膜，在ERMS/FN细胞中表达量降低5倍；更关键的是，ephrin-A5在所有测试细胞系中均检测不到表达。这种表达模式的紊乱解释了为何经典EphA7-ephrin-A5信号轴无法在RMS中正常运作。

仅EphA7-Fc和ephrin-A5-Fc抑制hRMS细胞增殖
在全面测试现有Eph/ephrin-Fc嵌合体库后发现，其他家族成员均无显著抗增殖效果，凸显出EphA7和ephrin-A5在RMS治疗中的独特地位。这种特异性提示其作用机制可能涉及RMS特异的受体-配体组合。

在hRMS中，ephrin-A5通过结合EphA8抑制增殖，EphA7通过结合ephrin-A2抑制增殖
通过siRNA筛选实验最终破解了信号路径之谜：敲低EphA8可完全阻断ephrin-A5-Fc的抗增殖效应，而敲低ephrin-A2则抵消EphA7-Fc的作用。这一发现不仅解释了前期反常结果，更揭示了肿瘤细胞如何"劫持"正常发育信号通路为己所用。

这项研究的意义远超出预期。首先，它首次系统描绘了RMS中Eph/ephrin信号网络的异常重构，为理解肿瘤细胞如何扭曲发育程序提供了新视角。其次，发现ephrin-A5-Fc比EphA7-Fc更强的抗肿瘤效果具有重要转化价值——相较于膜受体激动剂，可溶性配体更易开发为临床药物。值得注意的是，虽然ARMS/FP细胞对分化诱导相对抵抗（MyHC表达增加不显著），但通过p21实现的细胞周期阻滞仍为其治疗提供了可行路径。

研究也留下若干待解之谜：EphA7为何在RMS中错误定位至高尔基体？EphA8-ephrin-A2轴的下游效应器如何与肌源性分化程序耦合？这些问题的解答将有助于优化治疗方案。结合近年发现表观遗传调控剂可解除ARMS/FP的分化阻滞，未来研究或可探索Eph/ephrin信号与表观遗传调控的协同效应，为攻克这种儿童恶性肿瘤开辟新途径。