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为探究肝窦阻塞综合征（SOS）中血小板与肝细胞死亡的关联，研究人员利用小鼠 SOS 模型及体外共培养实验，发现血小板聚集可诱导自身 FasL 表达，通过 FasL-Fas 通路引发肝细胞凋亡，且 rTM 治疗可缓解，为 SOS 治疗提供新方向。
肝窦阻塞综合征（SOS）是一种致命的肝脏疾病，常发生于肝移植、造血干细胞移植或化疗后，其特征是肝窦内皮细胞损伤和肝细胞死亡。目前，SOS 的发病率和死亡率较高，严重威胁患者生命健康，但血小板在 SOS 中与肝细胞死亡的关系尚不清楚。为了揭示其中的机制，日本金泽大学的研究人员开展了相关研究，其成果发表在《Scientific Reports》上。
研究人员主要采用了以下关键技术方法：构建小鼠 SOS 模型，通过腹腔注射 monocrotaline（MCT）诱导小鼠发生 SOS；运用免疫组织化学技术检测肝组织中相关蛋白的表达，如 SE-1（肝窦内皮细胞标志物）、CD42b（血小板标志物）、cleaved caspase-3、Fas 和 FasL 等；进行 TUNEL 实验检测肝细胞凋亡情况；分离小鼠和人类血小板，通过 Western blotting 检测 FasL 蛋白表达；利用流式细胞术分析血小板的活化情况；开展 HepG2 细胞与激活血小板的共培养实验，观察肝细胞凋亡情况。
肝窦阻塞综合征模型小鼠肝脏中 SE-1 和 CD42b 表达的变化
通过免疫组织化学染色发现，注射 MCT 48 小时后，小鼠肝组织 zone 3 的 SE-1 阳性信号明显减少，表明肝窦内皮细胞（LSEC）受损。HE 染色显示，48 小时时肝窦严重扩张并伴有大量出血，肝脏损伤随时间加重。同时，CD42b 阳性血小板在 zone 3 的窦状隙内聚集，提示 LSEC 损伤与血小板活化 / 聚集有关。
肝窦阻塞综合征模型小鼠肝细胞凋亡情况
免疫组织化学染色和 TUNEL 实验表明，注射 MCT 48 小时后，zone 3 肝细胞中 cleaved caspase-3 阳性信号和 TUNEL 阳性细胞显著增加，而重组人可溶性血栓调节蛋白（rTM）预处理可抑制 cleaved caspase-3 阳性肝细胞死亡，说明 MCT 诱导的 SOS 模型小鼠发生了肝细胞凋亡，且 rTM 可逆转这一现象。
肝窦阻塞综合征模型小鼠肝脏中 Fas 和 FasL 的表达
免疫组织化学染色显示，与对照组相比，MCT 处理的 SOS 模型小鼠肝 zone 3 的 Fas 阳性肝细胞在 24 小时和 48 小时显著增加，而肝细胞中未检测到 FasL 表达。FasL 在 SOS 模型小鼠肝脏的窦状隙中表达显著增加，rTM 处理可显著降低 FasL 表达，且 CD42b 阳性血小板周围有部分表达 FasL，提示 FasL 可能出现在活化和聚集的血小板中。
活化血小板表面 FasL 的表达
Western blotting 显示，MCT 注射的 SOS 模型小鼠肝血管来源的血小板中可检测到 FasL 蛋白表达，而外周血血小板和非 SOS 对照小鼠血小板中未检测到。对人类血小板的研究发现，激活和聚集的血小板中 FasL 表达显著增加，且 FasL 诱导在翻译水平受调控。
FasL-Fas 系统与肝细胞凋亡的功能研究
共培养实验表明，激活和聚集的人类血小板与 HepG2 细胞共培养 2 小时后，可检测到 caspase3 阳性凋亡 HepG2 细胞，24 小时后 cleaved caspase-3 信号强烈，而 Fas/FasL 拮抗剂 Kp7-6 可显著抑制这一现象，在原代小鼠肝细胞中也得到了类似结果，共聚焦显微镜分析显示 FASL 和 FAS 分别在激活血小板和 HepG2 细胞中共定位。
研究结论表明，在 SOS 的病理过程中，肝 zone 3 的 LSEC 受损，CD42b 阳性血小板聚集，激活的血小板表达 FasL，通过 FasL-Fas 通路诱导肝细胞凋亡，rTM 治疗可抑制血小板中的 FasL 表达和肝细胞凋亡。该研究揭示了血小板在 SOS 肝细胞死亡中的关键作用，为 SOS 的治疗提供了新的潜在策略，即抗血小板治疗可能成为对抗 SOS 中肝细胞死亡和严重肝损伤的有效干预措施。同时，研究还为进一步理解血小板在其他肝脏疾病中的作用提供了思路。
