双因子CYR61与CTGF介导双调蛋白(AREG)调控人颗粒黄体细胞COX-2表达的新机制

本研究揭示了双调蛋白(AREG)通过EGFR-ERK1/2/AKT/CREB/YAP信号轴上调CYR61和CTGF表达，进而促进人颗粒黄体细胞(hGL)中COX-2表达的关键机制。研究人员利用KGN细胞系和原代hGL细胞模型，结合信号通路抑制剂和siRNA技术，首次证实CYR61/CTGF是介导AREG-LH信号串扰的核心效应分子，为卵巢功能调控及排卵障碍相关疾病提供了新的治疗靶点。

　　

在女性生殖系统中，排卵过程犹如一场精密编排的"分子交响乐"，其中黄体生成素(LH) surge（激增）是指挥这场演出的关键信号。作为LH下游效应分子，双调蛋白(amphiregulin, AREG)已被证实是卵泡液中含量最丰富的表皮生长因子受体(EGFR)配体，但其调控卵巢功能的具体机制仍存在诸多谜团。更引人关注的是，近年研究发现CCN家族成员CYR61(CCN1)和CTGF(CCN2)在卵泡发育和黄体形成中扮演重要角色，但它们是否参与AREG信号传递尚属未知。与此同时，环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)作为排卵过程中前列腺素合成的限速酶，其表达调控机制一直是生殖医学研究的焦点问题。

来自郑州大学第一附属医院生殖医学中心的研究团队在《Molecular and Cellular Endocrinology》发表的重要成果，首次系统阐明了AREG通过CYR61/CTGF调控COX-2表达的分子机制。研究采用KGN细胞系（人颗粒细胞肿瘤来源）和原代hGL细胞（来自接受体外受精治疗患者的卵泡液）双模型体系，结合Western blot、siRNA基因沉默、信号通路特异性抑制剂等技术，揭示了AREG-EGFR信号轴激活多通路协同调控CYR61/CTGF表达的全新机制。

AREG upregulates CYR61 and CTGF in both KGN and primary hGL cells
实验证实100 ng/mL AREG处理可显著提升KGN和原代hGL细胞中CYR61和CTGF蛋白水平，这种效应被EGFR抑制剂AG1478完全阻断。值得注意的是，该浓度模拟了人体卵泡液中AREG的生理浓度范围，具有重要生理意义。

Mechanistic analysis revealed that AREG-induced expression of CYR61 and CTGF was mediated through the ERK1/2, AKT, CREB, and YAP signaling pathways
通过磷酸化抗体检测发现AREG能快速激活ERK1/2和AKT磷酸化，而特异性抑制剂U0126(ERK1/2抑制剂)和LY294002(AKT抑制剂)可分别阻断约60%的CYR61/CTGF诱导。更深入的研究显示，转录因子CREB^Ser133
和Hippo通路效应分子YAP^Ser127
的磷酸化状态变化是调控关键，使用666-15抑制YAP或siRNA沉默CREB均显著降低CYR61/CTGF表达。

Knockdown of CYR61 and CTGF attenuated AREG-induced COX-2 expression
基因沉默实验证实，同时敲低CYR61和CTGF可使AREG诱导的COX-2表达降低75%，远高于单独敲低任一因子的效果（约40%），表明二者存在协同作用。更令人振奋的是，在LH刺激实验中，EGFR抑制或CYR61/CTGF敲低同样显著减弱LH诱导的COX-2表达，这为LH-AREG-CCNs-COX-2信号轴提供了直接证据。

这项研究构建了"LH→AREG→EGFR→(ERK1/2/AKT/CREB/YAP)→CYR61/CTGF→COX-2"的完整信号通路，不仅填补了LH调控卵巢功能分子机制的关键空白，更为多囊卵巢综合征等排卵障碍疾病的治疗提供了CYR61和CTGF这一对潜在新靶点。特别值得注意的是，研究发现YAP信号参与AREG响应，这为理解机械力信号与生长因子信号在卵泡发育中的crosstalk（串话）开辟了新视角。未来针对CCN家族分子干预策略的开发，或将革新生殖内分泌疾病的治疗格局。