灭活CV-A16疫苗在小鼠模型中诱导持久体液与细胞免疫应答及保护效力研究

本研究针对手足口病(HFMD)主要病原体柯萨奇病毒A16型(CV-A16)疫苗研发需求，通过建立小鼠模型系统评估了灭活CV-A16疫苗的免疫原性与保护效力。研究发现该疫苗可诱导持续6个月的中和抗体与记忆B细胞应答，首次鉴定出VP1/VP3区4个T细胞表位，在主动免疫-攻毒实验中使新生昆明小鼠获得90%-100%保护率。该研究为多价疫苗开发提供了重要数据支撑，论文发表于《Vaccine》。

　　

手足口病(HFMD)是困扰全球儿童健康的重大传染病，近年来在亚太地区持续流行。虽然肠道病毒71型(EV-A71)疫苗已上市，但作为HFMD另一主要病原的柯萨奇病毒A16型(CV-A16)仍缺乏有效防控手段。更棘手的是，随着EV-A71疫苗普及，CV-A16在流行病学谱系中的占比正显著上升。面对这一公共卫生挑战，武汉生物制品研究所团队在《Vaccine》发表重要研究成果，系统阐释了灭活CV-A16疫苗的免疫保护机制。

研究采用Vero细胞培养的CV-A16临床分离株，通过氯化铯密度梯度离心纯化获得空壳(EP)和实心(FP)病毒颗粒，以1:5比例混合制备疫苗候选物(MP)。关键技术包括：建立BALB/c小鼠免疫评价体系检测中和抗体与T细胞应答；采用流式细胞术追踪记忆B细胞；使用鼠适应CV-A16株构建14日龄昆明小鼠攻毒模型；通过ELISpot和ELISA分析细胞因子分泌谱。

免疫原性研究
疫苗诱导的中和抗体效价在二次免疫后达峰值，可持续6个月。流式检测显示CD19⁺
CD27⁺
记忆B细胞比例显著升高。ELISpot首次鉴定出VP1(第15-23、105-113位氨基酸)和VP3(第25-33、209-217位氨基酸)的4个特异性T细胞表位，为疫苗设计提供新靶点。

保护效力评估
在主动免疫-攻毒实验中，0.1μg、0.5μg和2.5μg剂量组保护率分别为90%、100%和100%。相较铝佐剂对照组全部出现后肢麻痹死亡，免疫组小鼠肌肉组织病毒载量降低1000倍，病理损伤显著减轻。被动免疫实验证实血清中和抗体是主要保护因素。

讨论与意义
该研究突破在于：阐明灭活CV-A16疫苗可同时激发持久体液免疫（记忆B细胞）与细胞免疫（Th1/Th2混合应答）；建立的鼠模型解决了灵长类动物成本高的问题；为EV-A71/CV-A16二价疫苗研发奠定基础。作者Xing-Xing Qin等特别指出，VP3_209-217
表位的发现填补了CV-A16细胞免疫研究空白。这些发现不仅推动HFMD疫苗研发，也为其他小RNA病毒疫苗设计提供了重要参考范式。