意大利北部家犬中Hepatozoon canis与Theileria orientalis隐性感染的分子流行病学及诊断策略优化研究

本研究针对意大利北部家犬中蜱传原虫感染漏诊问题，通过广谱18S rDNA PCR技术对155只临床就诊犬进行筛查，首次报道意大利犬源Theileria orientalis感染，并检出Hepatozoon canis（8例）和Babesia canis（2例）。研究揭示复合诊断技术对发现共感染的价值，为犬科动物在寄生虫传播链中的角色提供新证据。

　　

蜱虫传播的原虫感染一直是威胁犬类健康的重要问题，尤其在意大利北部地区，这类疾病的流行病学特征和诊断方法仍存在诸多未知。Babesia、Theileria和Hepatozoon等顶复门（Apicomplexa）血原虫通过硬蜱传播，可导致犬只出现溶血性贫血、发热等多系统症状。然而，常规诊断方法往往仅针对特定病原体，可能漏诊非常见虫种或混合感染。更棘手的是，犬类作为Theileria orientalis的潜在宿主角色尚未明确，而Hepatozoon canis的遗传多样性及其临床意义也需进一步探索。

为回答这些问题，博洛尼亚大学兽医学院的研究团队开展了一项突破性研究。通过对155只临床就诊犬的163份样本（包括血液、骨髓和淋巴结）进行广谱18S rDNA半巢式PCR检测，结合系统发育分析，首次在意大利犬只中发现Theileria orientalis复合体感染，同时检出8例Hepatozoon canis和2例Babesia canis。该成果发表于《Research in Veterinary Science》，为蜱传疾病诊断提供了新范式。

研究采用三项关键技术：1）针对groEL基因的Anaplasmataceae筛查PCR；2）基于线粒体DNA的Babesia spp.定量PCR；3）创新的半巢式PCR技术（CRYPTO F/RLBR2引物）扩增18S rDNA约800bp片段。样本来自2017-2023年间博洛尼亚大学动物医院就诊犬，通过双向盲法实验设计确保结果可靠性。

【结果】
3. Results
研究发现7.1%的犬只（11/155）携带血原虫：Babesia canis（1.3%）与克罗地亚狩猎犬株高度相似；Theileria orientalis（0.6%）与缅甸犬源株亲缘最近；Hepatozoon canis（5.1%）呈现显著遗传多样性。值得注意的是，6例H. canis阳性犬存在共感染（如犬细小病毒、利什曼原虫），而唯一T. orientalis阳性犬合并心包积液与利什曼病。

1. Discussion
   该研究首次证实意大利犬中存在T. orientalis感染，其序列与当地野生有蹄类动物源Theileria sp.存在差异，暗示犬可能为偶然宿主。Babesia canis病例均与克罗地亚狩猎旅行相关，但研究者指出当地Dermacentor reticulatus蜱中已发现该病原，提示潜在本土传播风险。

Hepatozoon canis的临床意义尤为突出：83.3%阳性犬存在共感染或基础疾病，包括免疫介导性溶血性贫血（IMHA）和免疫抑制治疗病例。系统发育分析显示，这些菌株与西班牙狐源株聚簇，而与犬科动物源参考株明显分化，反映18S rDNA基因存在单核苷酸多态性（SNPs）。

【结论】
研究强调广谱分子检测对蜱传疾病诊断的必要性，特别是存在共感染时。H. canis可能通过破坏宿主细胞膜或免疫抑制加剧其他病原体致病性。该成果不仅完善了意大利北部寄生虫流行病学图谱，更提出了犬只在Theileria传播链中的潜在作用这一全新科学问题，为制定精准防控策略奠定基础。