健康供体BK病毒特异性T细胞应答与HLA基因型、RhD状态及CMV/EBV血清学的关系及其在优化细胞治疗中的意义

这篇研究揭示了健康供体中BK病毒(BKV)特异性T细胞应答与HLA基因型、RhD阴性状态及CMV/EBV血清阴性的显著关联。通过ELISpot和流式细胞术分析222名供体样本，发现HLA-B前导序列多态性（rs1050458）中苏氨酸(T)的存在可增强VP1特异性免疫应答，为优化移植患者BKV特异性T细胞治疗供体筛选提供了重要分子标志。

　　

BK病毒特异性T细胞应答的特征分析
研究团队通过刺激222名健康供体外周血单个核细胞(PBMCs)，采用干扰素-γ(IFN-γ) ELISpot和流式细胞术检测BK病毒(BKV)衣壳蛋白VP1和大T抗原(LTA)的免疫应答。结果显示94.2%供体对VP1产生应答，显著高于LTA的68.8%，且CD4⁺T细胞在应答中占主导地位，其IFN-γ产量与ELISpot斑点形成单位(SFU)呈强相关(r=0.72, p<0.0005)。

供体特征与免疫应答的关联
RhD阴性供体表现出更强的VP1特异性应答(p<0.05)，尤其在O型血群体中差异显著。CMV/EBV血清阴性供体的T细胞应答强度分别是血清阳性组的1.8倍和2.3倍(p<0.005)。流式分析揭示NKG2A⁺效应记忆T细胞仅存在于HLA-B前导序列含T等位基因(MT/TT)的供体中，该群体CD3⁺IFN-γ⁺细胞比例较MM基因型高37%。

HLA基因型的调控作用
HLA-A02:01和HLA-C06:02携带者呈现高强度应答，而HLA-B44:03和HLA-C07:01则与应答减弱相关(p<0.0005)。单倍型分析发现HLA-DRB1 * 01:01~DQB1 * 05:01与VP1高应答相关(stdres>2.58)。值得注意的是，HLA-B前导序列第21位苏氨酸(T)的存在使VP1应答强度增加2.1倍，该多态性通过调控HLA-E/NKG2A通路影响T细胞活化。

临床转化价值
研究首次系统阐明了供体HLA基因型与非经典MHC分子（如HLA-E）的协同调控机制。发现RhD阴性、CMV/EBV血清阴性且携带HLA-B*T等位基因的供体最适合用于BKV特异性T细胞制备，为移植后BKV感染的治疗提供了精准的供体筛选策略。这些发现已应用于ReDoCel细胞供体库的优化，显著提升了异体T细胞治疗的匹配效率。

方法学创新
采用NGS进行高分辨率HLA分型（涵盖HLA-A/B/C/DRB1/DQB1等10个基因座），结合PepTivator多肽库全覆盖刺激策略，建立了可同时评估CD4⁺/CD8⁺T细胞应答的标准化流程。开发的"应答强度四分位分级系统"（高应答者≥Q3=390.8 SFU）为临床供体分级提供了量化标准。

局限性讨论
研究未解析特定HLA等位基因呈递的精确表位，且 heterozygous供体的等位基因竞争可能影响结果解读。未来需通过HLA纯合子供体或抗原呈递细胞系进一步验证。目前发现已为国际细胞治疗协会(ISCT)制定BKV特异性T细胞产品标准提供了重要依据。