T细胞依赖性双特异性抗体（TDB）通过免疫突触（IS）形成激活免疫杀伤效应的机制研究及其在实体瘤治疗中的突破意义

这篇研究深入解析了T细胞依赖性双特异性抗体（TDB）通过免疫突触（IS）形成激活T细胞的关键机制，揭示了IS介导的旁观者效应和T细胞迁移对实体瘤治疗的协同作用。作者利用EGFR/CD3 TDB（hEx3）和EGFR敲除（KO）癌细胞模型，证实IS形成可显著增强细胞因子（IFN-γ/TNF-α）释放和CXCL10趋化因子分泌，并通过HMGB1等损伤相关分子模式（DAMPs）促进T细胞浸润。研究为克服肿瘤异质性提供了新策略，强调了IS评估体系在抗体药物开发中的重要性。

　　

免疫突触形成作为TDB激活免疫杀伤的核心机制

摘要
T细胞依赖性双特异性抗体（TDB）通过桥接癌细胞与T细胞发挥抗肿瘤作用，但其在实体瘤中的疗效受限。本研究聚焦免疫突触（IS）形成这一关键生物学过程，揭示其通过调控旁观者效应和T细胞迁移增强治疗效果的机制。

引言
TDB可绕过MHC限制直接激活T细胞，但肿瘤微环境异质性阻碍其疗效。IS作为T细胞与靶细胞间的动态连接结构，其形成的分子机制（如SMAC三层结构）与功能（如穿孔素/颗粒酶定向释放）尚未完全阐明。作者采用EGFR/CD3 TDB（hEx3）和CRISPR-Cas9构建的EGFR-KO细胞，系统研究IS对肿瘤杀伤的直接影响与间接调控网络。

材料与方法
实验采用人源化IgG1双抗hEx3-scDb-Fc(H237Y)-HL，靶向胰腺癌细胞AsPC-1（WT/KO）和扩增的人外周血T细胞。通过：

1. 免疫荧光定量IS面积（F-actin/CD3共定位）
2. WST-8法检测细胞毒性（E:T=5:1/2:1）
3. ELISA分析IFN-γ/TNF-α/CXCL10/HMGB1释放
4. Trans-well实验评估T细胞迁移
   关键创新点在于建立KO模型排除TAA低表达干扰，并开发混合培养体系模拟肿瘤异质性。

结果

1. IS动态形成：高浓度TDB（10 ng/mL）使WT的IS面积增加3.2倍（p<0.0005），KO无显著变化。
2. 细胞杀伤梯度：72小时共培养后，WT死亡率达85%，而KO始终<15%（p<0.005）。
3. 细胞因子时序差异：
   • IFN-γ持续升高（72小时达峰值）
   • TNF-α仅在早期（24小时）显著释放
4. 旁观者效应：当WT占比≥20%时，KO死亡率提升至40%（E:T=5:1, 72小时）。
5. 迁移机制：
   • IFN-γ+HMGB1组合使T细胞迁移数增加2.8倍（vs对照组）
   • CXCL10单独作用不显著，但与TNF-α协同增强效果

讨论
研究首次阐明IS通过三重机制增强TDB疗效：

1. 直接杀伤：强化SMAC结构促进穿孔素递送
2. 免疫微环境重塑：IFN-γ-CXCL10轴招募T细胞浸润
3. 表位扩展：HMGB1释放激活天然免疫
   临床启示包括：

• 优化给药策略避免CRS（与TNF-α峰相关）
• 联合NAA抑制剂逆转IS抑制
  局限性在于需进一步验证体内模型及探索PD-1/CTLA-4联合疗法。

结论
该研究为TDB设计提供了理论框架，强调IS评估体系可作为预测疗效的生物标志物，并为攻克实体瘤异质性难题开辟新路径。