乌苏图病毒(USUV)实验性感染欧亚乌鸫(Turdus merula)的病理学与传播动力学研究

为解决乌苏图病毒(USUV)在易感鸟类中的致病机制和传播途径不明确的问题，荷兰伊拉斯谟医学中心团队通过实验性感染欧亚乌鸫，系统研究了非洲3型(Afr3)和欧洲3型(Eu3)病毒株的致病性、组织嗜性及病毒排放模式。研究发现，两种毒株均导致急性致死性疾病，伴随高病毒血症和多途径排毒，揭示了乌鸫在USUV传播循环中的关键作用，为野生动物疫病监测提供了重要模型。

　　

乌苏图病毒(USUV)是一种由蚊媒传播的黄病毒属(Flaviviridae)病原体，近年来在欧洲引发多起野生鸟类大规模死亡事件，尤其对欧亚乌鸫(Turdus merula)造成毁灭性打击。尽管自然感染病例的病理特征已有描述，但疾病发展过程、病毒动态分布及其传播潜力仍存在重大知识空白。这种认知缺口严重制约了疫情预测与防控策略的制定。更值得注意的是，USUV作为人兽共患病病原，已导致人类神经系统病例，凸显其公共卫生威胁。

针对这一科学挑战，荷兰伊拉斯谟医学中心的研究团队在《npj Viruses》发表了一项开创性研究。通过皮下接种两种流行毒株（非洲3型Afr3和欧洲3型Eu3），首次在受控条件下系统模拟了USUV在乌鸫中的感染进程。研究发现，所有感染个体在4-7天内均发展为致死性疾病，病毒快速扩散至中枢神经系统(CNS)和内脏器官，并通过咽部和泄殖腔持续排毒。这一模型成功复现了自然感染的核心特征，为理解USUV生态学提供了关键实验基础。

研究采用多学科技术手段：通过实时活动监测系统量化感染鸟类行为变化；采用组织培养感染剂量(TCID₅₀)测定和RT-qPCR分别评估病毒复制动力学与基因组负荷；结合H&E染色和免疫组化(IHC)解析病理损伤与病毒抗原分布；另通过焦点减少中和试验(FRNT)确认实验动物血清阴性状态。

实验结果
急性疾病与高死亡率
感染组乌鸫体重在6天内骤降25%，活动量显著降低（GAMM分析：P=0.003），表现为羽毛蓬松、弓背等非特异性症状。两种毒株致病性无统计学差异，但Afr3组在肝脏病毒载量(2.3×10⁶ TCID₅₀/g)和脾脏坏死程度（3级评分）上呈现更强毒性趋势。

多途径病毒排放
病毒血症在感染后1天即被检出，3天达峰（Ct值17.16-20.53）。值得注意的是，咽拭子(Ct 19.51-22.25)和泄殖腔拭子(Ct 20.41-25.27)中持续检出病毒RNA，提示口-粪传播可能性。羽毛样本病毒载量极低，不支持其作为有效监测样本。

组织嗜性与病理损伤
病毒广泛分布于脑、肝、脾等靶器官，其中小脑浦肯野细胞和肝窦内皮细胞呈现强IHC阳性。特征性病变包括：脾脏凝固性坏死（评分3/3）、脑神经元嗜酸性坏死（评分2/3）及轻度间质性肺炎。与自然感染相比，实验模型炎症反应较弱，反映疾病进程更为急性。

讨论与意义
该研究首次证实实验性感染可精准模拟USUV自然病程，揭示乌鸫急性死亡可能源于内脏器官而非CNS的早期损伤。虽然高病毒血症支持其作为扩增宿主，但短暂生存期可能限制传播机会。发现的口腔排毒现象为鸟类间非蚊媒传播提供了新假设，需进一步验证传染性病毒存在。

这项研究建立了首个USUV-乌鸫实验模型，其价值体现在三方面：1）为疫苗和抗病毒药物评价提供标准化平台；2）指导野外监测中样本采集策略（优先选择咽/泄殖腔拭子）；3）警示需关注USUV通过非传统途径跨种传播的风险。未来研究可优化接种剂量以模拟慢性感染，或探索其他易感物种作为持续性感染模型。

技术方法上，研究团队采用Vero细胞培养病毒（MOI=0.01），通过皮下接种（10⁴ TCID₅₀/100μl）建立感染模型；使用自动化图像分析系统量化笼养鸟类活动轨迹；采用Spearman-Karber法计算组织病毒滴度；组织病理学采用双盲评分系统（0-3分）。所有实验均遵守欧盟动物福利指令2010/63。

50/g检测；b RT-qPCR检测肺与端脑病毒RNA'>