基于适配体/抗体夹心结构与原位金生长信号放大的侧向层析试纸条高灵敏检测血管内皮生长因子165

为解决癌症早期筛查中VEGF165检测成本高、抗体种类有限的问题，研究人员开发了一种结合适配体识别与原位金生长信号放大（ISGGS）的侧向层析试纸条（LFA）。该研究通过构建"抗体-VEGF165-适配体"夹心结构，实现了0.12 ng/mL的超高灵敏度检测，并成功拓展至cTnI双标志物同步检测，为POCT（床旁检测）提供了便携、低成本的解决方案。

　　

在癌症早期诊断领域，血管内皮生长因子165（VEGF₁₆₅）作为关键生物标志物，其检测灵敏度与成本一直是临床应用的瓶颈。传统ELISA方法虽可靠，但受限于抗体高昂价格和稳定性问题；而现有侧向层析试纸条（LFA）又面临灵敏度不足的挑战。如何开发兼具高灵敏、低成本且便于床旁检测（POCT）的技术，成为亟待突破的科学难题。

针对这一需求，国内研究团队在《Chinese Journal of Analytical Chemistry》发表创新成果。该研究巧妙融合适配体识别与原位金生长信号放大（ISGGS）技术，构建了新型LFA检测平台。通过优化"抗体-VEGF₁₆₅-适配体"夹心结构，并引入HAuCl₄/对苯二酚（HQ）介导的金纳米颗粒（AuNPs）原位生长放大信号，实现了VEGF₁₆₅的超灵敏检测。研究还成功将该平台拓展至心肌标志物cTnI检测，并开发出双通道同步检测试纸条。

关键技术包括：1）筛选最优抗体/适配体组合（Ab/AP1）；2）40 nm金纳米颗粒（AuNPs）的柠檬酸钠还原法制备及链霉亲和素（SA）修饰；3）试纸条组装与信号探针（AP1-SA-AuNPs）优化；4）HAuCl₄/HQ介导的原位金生长信号放大；5）双标志物检测通道设计。实验使用人工血清验证临床适用性。

【"抗体-VEGF₁₆₅-适配体"夹心结构】
通过ELHSA（酶联杂交夹心法）筛选出最佳抗体/适配体组合Ab/AP1，信号比达8.87。将VEGF₁₆₅抗体固定于T线，互补DNA（CAP1）修饰C线，构建基础LFA结构。

【AuNP功能化与适配体浓度优化】
TEM证实40 nm AuNPs成功修饰链霉亲和素（SA），紫外吸收峰红移5 nm。200 nM AP1适配体浓度可平衡稳定性和识别效率，避免假阳性。

【信号放大与性能验证】
ISGGS使检测限从20 ng/mL降至0.12 ng/mL，线性范围5-50 ng/mL（R²=0.99089）。人工血清中回收率96.2%-106.8%，且对CEA、PSA等标志物无交叉反应。

【平台普适性验证】
相同原理构建的cTnI试纸条检测限达0.006 ng/mL。双通道试纸条可同步检测VEGF₁₆₅（0.85 ng/mL）和cTnI（0.015 ng/mL），虽灵敏度略有下降，但实现"一卡双检"。

该研究突破传统LFA灵敏度限制，通过ISGGS将检测限提升两个数量级。创新性采用适配体替代部分抗体，显著降低成本。双标志物检测设计尤其适合癌症与心血管疾病联合筛查的临床需求。平台普适性为其他标志物检测提供技术范式，其便携特性更符合基层医疗场景需求，对推动POCT发展具有重要价值。