高效液相色谱与酶联免疫吸附法在天然漆树物种及栽培品种鉴定中的应用研究

为解决漆器文物中天然漆来源鉴定难题，研究人员采用高效液相色谱(HPLC)和酶联免疫吸附测定(ELISA)技术，对比分析亚洲三种漆树（缅甸漆树、野漆树与 domesticated/undomesticated 中国漆树）的酚类衍生物及糖蛋白差异，首次建立定量区分四种漆膜的方法，为文化遗产保护提供精准技术支撑。

　　

天然漆作为人类使用8000年的环保材料，其来源鉴定一直是文化遗产研究的难点。亚洲三种漆树——缅甸漆树（Melanorrhoea usitata）、野漆树（Toxicodendron succedaneum）和中国漆树（T. vernicifluum）——分泌的漆液成分差异微妙，尤其是中国漆树经千年人工选育形成的 domesticated（小木）与 undomesticated（大木）栽培种，仅存在糖蛋白含量差异。传统方法如热裂解-气相色谱/质谱（Py-GC/MS）难以区分后者，而漆器文物样本稀少且老化严重，亟需高灵敏度鉴定技术。

山东省自然科学基金资助项目团队采集了9份漆液样本（含3种大木漆、3种小木漆、2份越南野漆及1份缅甸漆），通过高效液相色谱（HPLC）分离酚类衍生物（urushiol/laccol/thitsiol），发现小木漆的极性urushiol含量更高；采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）揭示小木漆糖蛋白分子量更小。团队进一步制备针对T. vernicifluum和T. succedaneum糖蛋白的多克隆抗体，建立定量ELISA法，首次实现四种漆膜的明确区分。

主要技术方法
研究结合HPLC分析酚类衍生物极性差异，SDS-PAGE分离糖蛋白分子量，柱色谱纯化抗原，并开发基于抗体-糖蛋白特异性结合的ELISA定量检测体系。样本来自中国本土栽培漆树及越南引入品种。

研究结果

漆液样本的HPLC鉴定
HPLC色谱图显示，缅甸漆（MU）的thitsiol保留时间最长（非邻苯二酚结构），野漆（TS）的laccol（C₁₇烃基）次之，中国漆树的urushiol（C₁₅烃基）最早出峰。小木漆（TVX）比大木漆（TVD）极性组分更多，印证其urushiol修饰程度更高。

糖蛋白差异与抗体开发
SDS-PAGE显示小木漆糖蛋白集中于14.3–30 kDa，大木漆则多分布于30–95 kDa。针对T. vernicifluum 55 kDa糖蛋白和T. succedaneum 32 kDa糖蛋白制备的抗体，在ELISA中表现出显著交叉反应差异，定量阈值达0.1 μg/mL。

结论与意义
该研究首次揭示人工选育导致漆树糖蛋白分子量趋小的进化特征，建立的ELISA法可检测微量老化漆膜，解决了考古样本无法用Py-GC/MS区分的困境。未来可拓展至其他漆树物种抗体库构建，为东亚漆器贸易路线研究提供分子证据。论文发表于《Microchemical Journal》，作者Meng Wu强调该方法在文化遗产科学中的转化潜力。