胎盘特异性Cyp19a1-Cre-EGFP转基因小鼠模型的构建及其在滋养层细胞基因靶向重组中的应用

为解决胎盘特异性基因操纵技术难题，研究人员开发了基于Cyp19a1启动子的Cre-EGFP双功能转基因小鼠模型。该模型通过显微注射构建，证实Cre重组酶仅特异性表达于胎盘滋养层细胞，与Nr3c1loxP/loxP小鼠杂交后实现GR基因高效敲除（P < 0.05），为研究胎盘发育及相关妊娠疾病提供了精准遗传工具。

　　

胎盘作为母胎交流的核心器官，其功能障碍与子痫前期（PE）、妊娠期糖尿病（GDM）等疾病密切相关。然而，现有胎盘基因编辑工具存在靶向性不足、需依赖报告鼠验证等技术瓶颈。尤其当涉及糖皮质激素受体（GR）等广泛表达的基因时，传统方法难以区分胎盘特异性效应与全身性影响。

为解决这一难题，研究人员构建了Cyp19a1-Cre-EGFP双报告转基因小鼠。该模型创新性地将人源CYP19A1启动子与Cre-EGFP融合，通过原核显微注射技术获得15个转基因 founder 品系。免疫荧光与PCR分析显示，EGFP信号仅存在于胎盘迷路层滋养细胞，母体卵巢、杏仁核及胎肝均无渗漏表达。与Nr3c1^loxP/loxP小鼠杂交后，免疫组化证实胎盘GR表达显著降低（P < 0.05），而子代生长发育未受影响。

主要技术方法
研究采用原核显微注射构建转基因小鼠，通过共聚焦显微镜和免疫荧光验证组织特异性，PCR进行基因型鉴定。利用Nr3c1^loxP/loxP小鼠开展基因重组效率测试，免疫组化定量GR蛋白表达。

研究结果

1. Generation of Cyp19a1-Cre-EGFP Transgenic Mice
   成功获得15个转基因 founder 品系，EGFP表达严格限定于胎盘迷路层，母体及胚胎其他组织无交叉表达。

2. Validation of Cre-Mediated Recombination
   与GR floxed 小鼠杂交后，胎盘GR蛋白表达下降超过70%，证实该模型可实现高效特异性基因敲除。

3. Phenotypic Characterization
   转基因小鼠生育力、胎盘形态与野生型无差异，排除Cre表达引起的发育毒性。

结论与意义
该研究首创的Cyp19a1-Cre-EGFP模型解决了传统胎盘基因编辑需依赖报告鼠、靶向细胞类型有限等问题。其双报告设计可直接通过荧光监测Cre活性，显著提升实验效率。特别适用于研究GR等基因在胎盘迷路层的特异性功能，为解析子痫前期等疾病的胎盘机制提供了不可替代的工具。作者团队（Zhi-Jian Wang、Shu-Min Pan等）在讨论中指出，该模型未来可拓展至胎盘源性外泌体研究等领域，具有重要转化价值。论文发表于《Placenta》。