防御假单胞菌FD6抗菌代谢物鉴定及其对灰霉病菌的抑制作用

　　 摘要:

目的 研究防御假单胞菌(Pseudomonas protegens) FD6发酵粗提物的抑菌活性及其作用机制，解析粗提物中主要的活性物质。方法 通过平板对峙试验筛选发酵最佳的培养基、萃取剂、溶剂，以及发酵粗提物抑菌活性的稳定性。利用MALDI-TOF/TOF质谱鉴定粗提物中主要抗菌物质，并探究粗提物的抑菌谱。通过菌丝形态观察、孢子萌发试验、PI染色及电导率测定，探究粗提物对番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)的抑菌作用机制。结果 平板对峙试验表明，菌株FD6以不添加碳源马铃薯汁培养基进行发酵的粗提物抑菌活性最强。以乙酸乙酯作为萃取剂，通过甲醇溶解所得的粗提物抑菌活性最强。质谱分析表明，粗提物中含有环脂肽orfamide A。进一步检测粗提物抑菌谱，发现其对桃枝枯病菌(Phomopsis amygdali)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、梨炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)和桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)均具有抑制作用。稳定性试验发现，粗提物在121 ℃处理20 min以及pH 4.0-10.0条件下抑菌活性稳定，且蛋白酶K和胰蛋白酶处理不影响其抑菌活性。粗提物处理B. cinerea菌丝可导致其形态异常，B. cinerea分生孢子经2.0 mg/mL粗提物处理后萌发被完全抑制，50%的细胞膜受到破坏，电导率增加，细胞内核酸与蛋白外渗。结论 防御假单胞菌FD6产生的代谢物抑菌谱广且稳定性强，为发掘新型绿色农药提供先导化合物。