复制缺陷型FCV-△VP2疫苗在猫体内诱导强效免疫保护及作为病毒载体的潜力研究

（编辑推荐）本研究通过反向遗传学构建复制缺陷型猫杯状病毒(FCV)疫苗候选株rHBDL2 FCV-△VP2，证实其能在表达VP2蛋白的F81-VP2细胞中高效增殖（滴度达109.43 TCID50/mL），免疫猫产生高水平中和抗体（最高1:29.4），显著降低强毒株VS-FCV攻击后的临床症状和组织病理损伤。创新性展示该平台可作为多价疫苗载体（成功携带mCherry报告基因），为Caliciviridae家族病毒防控提供新策略。

　　

复制缺陷型FCV疫苗的构建与特性

研究团队通过删除猫杯状病毒(FCV) VP2基因N端19-48位核苷酸，构建了复制缺陷型疫苗候选株rHBDL2 FCV-△VP2。该病毒仅在稳定表达VP2蛋白的F81-VP2细胞系中复制（滴度达10^9.43 TCID₅₀/mL），而在常规F81细胞中仅完成单周期感染。透射电镜证实缺失VP2 N端不影响病毒颗粒组装，但Western blot显示感染6小时后VP1表达量显著低于野生型(WT)毒株。

免疫原性与保护效力

猫体实验显示，10⁸ TCID₅₀/mL剂量组初次免疫21天即实现血清转化，加强免疫后中和抗体几何平均滴度达1:2^9.4。攻毒实验证实，免疫组猫在VS-FCV攻击后：

• 临床评分降低86%（vs未免疫组）
• 肺组织病毒载量下降3个数量级
• 眼/鼻分泌物排毒期缩短至6-9天（对照组持续15天）
  组织病理学显示免疫组呼吸道组织无显著损伤，而对照组出现肺泡间隔增厚（炎症细胞浸润评分2.8±0.4）。

多价疫苗策略创新

将疫苗株VP1替换为呼吸道型QD2毒株VP1，构建的嵌合病毒rHBDL2_{QD2 VP1} FCV-△VP2与原型株联合免疫后，血清对5类FCV野毒（包括GI/GII基因型）的中和活性提升4-16倍。尤为关键的是，该组合对疫苗株2280的中和抗体滴度从1:2^3.2提升至1:2^7.1。

病毒载体平台验证

在VP2缺失区插入mCherry报告基因构建的rHBDL2 FCV-△VP2_mCherry连续传代20代仍保持稳定荧光表达（电镜证实病毒形态完整），生长曲线显示其滴度维持在10^8.94 TCID₅₀/mL，为开发携带外源基因的多联疫苗奠定基础。

该研究突破传统减毒/灭活疫苗局限，首次实现：

1. 基于VP2功能缺失的FCV复制缺陷疫苗产业化（批产量>10⁹ TCID₅₀/mL）
2. 双价疫苗交叉保护覆盖98%流行株
3. 病毒载体可拓展至其他杯状病毒（如诺如病毒）疫苗研发。组织分布实验证实疫苗株不侵入心、肝、脾等实质器官，安全性显著优于现有减毒疫苗。