m6A依赖性核内非编码RNA PANC754通过形成ncRNA/RBP/组蛋白抑制复合体增强结直肠癌免疫治疗

本研究针对结直肠癌(CRC)免疫治疗响应率低的临床难题，揭示了新型非编码RNA PANC754的肿瘤抑制机制。研究人员通过多组学分析发现，METTL3介导的m6A修饰调控核定位的PANC754与RNA结合蛋白PSPC1及组蛋白修饰H3K4me1形成抑制复合体，下调免疫逃逸分子LGALS7表达，显著增强抗NKG2A抗体Monalizumab的疗效。该成果为CRC联合免疫治疗提供了新靶点，发表于《Cell Death and Disease》。

　　

在恶性肿瘤治疗领域，结直肠癌(CRC)的免疫治疗响应率长期徘徊于20%以下，其核心瓶颈在于肿瘤细胞的免疫逃逸机制。近年研究发现，"别吃我"信号分子Galectin-7(LGALS7)在多种癌症中高表达，通过抑制自然杀伤细胞(NK)和细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)的活性帮助肿瘤逃避免疫监视。与此同时，表观遗传修饰尤其是m6A甲基化被证实可调控非编码RNA(ncRNA)功能，但这类调控网络在CRC免疫微环境重塑中的作用仍属未知。

南通大学附属医院的研究团队在《Cell Death and Disease》发表的重要研究，首次揭示了核内ncRNA PANC754通过形成m6A依赖性分子复合物调控CRC免疫逃逸的创新机制。研究人员综合利用TCGA数据库挖掘、26例CRC患者队列分析、细胞及动物模型验证等多维度方法，发现低表达的PANC754在CRC中具有显著抑癌效应。

关键技术方法包括：TCGA泛癌分析鉴定PANC754表达谱；m6A甲基化RNA免疫沉淀(MeRIP)-PCR检测修饰位点；RNA pulldown联合LC-MS/MS筛选RNA结合蛋白(RBP)；染色质免疫共沉淀(Co-IP)验证蛋白互作；75例CRC患者血清标志物检测；以及PBMCs与CRC细胞共培养系统评估免疫治疗增效作用。

PANC754抑制CRC细胞生长和转移
通过TCGA数据库泛癌分析筛选出1615个差异表达ncRNA，其中PANC754在23种癌症中普遍低表达。临床样本验证显示CRC组织中PANC754表达显著低于癌旁组织。功能实验证实过表达PANC754可使SW480和DLD1细胞增殖率降低50%以上，凋亡率增加3倍，迁移距离减少60%，且上皮-间质转化(EMT)标志物E-cadherin表达上调。

m6A甲基化调控PANC754表达
SRAMP在线预测发现PANC754序列1249-1253位点存在GGACU保守基序。MeRIP-PCR证实该位点m6A修饰水平与PANC754表达呈正相关。敲除甲基转移酶METTL3可使PANC754的m6A修饰降低70%，mRNA水平下降60%；而过表达METTL3则使其表达提升2倍，证实METTL3通过m6A修饰正向调控PANC754。

核定位PANC754与PSPC1形成功能复合物
RNA荧光原位杂交(FISH)显示PANC754主要定位于细胞核。RNA pulldown联合质谱鉴定出43个互作蛋白，其中 paraspeckle组分1(PSPC1)具有典型RNA识别基序(RRM)。免疫共沉淀证实PSPC1可直接结合PANC754，且这种结合依赖于METTL3介导的m6A修饰。

表观遗传调控LGALS7免疫逃逸通路
RNA测序发现PANC754过表达使LGALS7 mRNA水平降低80%。机制研究表明，PANC754/PSPC1复合物招募组蛋白修饰H3K4me1至LGALS7启动子区形成抑制性染色质结构。分子对接显示PSPC1与H3K4me1结合能达-7.8 kcal/mol。使用H3K4抑制剂MTA处理可剂量依赖性下调LGALS7表达，证实该表观调控机制的特异性。

增强NKG2A免疫检查点抑制剂疗效
在PBMCs与HCT116细胞共培养体系中，PANC754过表达联合抗NKG2A抗体Monalizumab使肿瘤细胞凋亡率提升3倍，乳酸脱氢酶(LDH)释放量增加2.5倍。免疫细胞杀伤分子穿孔素(Perforin)分泌量显著升高，而"别吃我"信号LGALS7表达下降60%，证实PANC754可逆转肿瘤免疫抑制微环境。

这项研究创新性地揭示了m6A-ncRNA-组蛋白修饰的级联调控网络：METTL3介导的m6A修饰稳定PANC754表达，后者通过结合PSPC1招募H3K4me1形成表观遗传抑制复合物，特异性下调LGALS7表达从而解除免疫抑制。临床转化方面，研究发现血清游离PANC754(cfPANC754)水平与CRC淋巴结转移显著相关，且PANC754可显著提升Monalizumab的治疗响应，为CRC免疫治疗提供了"RNA表观调控+免疫检查点抑制"的联合治疗新策略。该研究不仅阐明了ncRNA在肿瘤免疫调控中的新机制，更为开发基于表观遗传编辑的肿瘤免疫治疗提供了理论依据。