结核分枝杆菌酸生长停滞的遗传决定因子鉴定：基于转座子突变测序(Tn-seq)的高通量分析

来自多国合作团队的研究人员针对结核分枝杆菌(Mtb)在酸性环境中的适应机制这一关键科学问题，通过构建饱和转座子突变库，结合高通量测序技术(Tn-seq)，系统鉴定了95个影响酸胁迫适应的关键基因（21个优势突变和74个缺陷突变），为揭示Mtb宿主适应机制提供了重要资源数据集PRJNA935700。

　　

结核病(TB)这一全球头号传染病杀手，其病原体结核分枝杆菌(Mtb)在宿主体内面临酸性环境等复杂胁迫。为揭示其酸生长停滞的分子机制，研究者构建了覆盖60% TA位点的H37Rv转座子突变库（10⁵克隆规模），通过pH 5.5 vs 7.0的对比培养实验，结合Illumina HiSeq 2500平台的高深度测序（300M reads/run，Q30>89.3%），鉴定出95个关键基因：21个突变体在酸性条件下呈现生长优势，74个出现缺陷。

实验采用?MycoMarT7噬菌体转导构建突变库，经Middlebrook 7H10培养基（含OADC补充剂）进行表型筛选。DNA样本通过CTAB法提取，经Covaris超声破碎至500bp后，利用NEB建库试剂盒完成末端修复和接头连接。生物信息学分析采用TRANSIT软件，Burroughs Wheeler比对显示，显著差异基因涉及细胞壁合成、脂代谢（如磷酸盐转运系统）及PE/PPE家族蛋白等功能类别。

该研究不仅验证了前期发现的磷酸盐感知通路作用，更提供了首个系统性酸胁迫遗传决定因子图谱。数据揭示的pH敏感基因群，为开发针对Mtb宿主适应环节的新型抗菌策略提供了分子靶标。冷冻保存的突变库资源（-80°C）和公开的测序数据，将助力全球科研人员深入探索结核杆菌的致病机制。