LINC00622通过BTF3-RRAGD-mTORC1轴抑制自噬性细胞死亡促进皮肤黑色素瘤发展的分子机制

本研究揭示了长链非编码RNA LINC00622在皮肤黑色素瘤中的关键作用。研究人员通过多组学分析发现LINC00622通过招募转录因子BTF3促进RRAGD表达，进而激活mTORC1信号通路抑制自噬性细胞死亡，为黑色素瘤治疗提供了新的靶点。该成果发表于《Cell Death and Disease》，为理解mTORC1调控的自噬在肿瘤中的双重角色提供了重要证据。

　　

皮肤黑色素瘤是最致命的皮肤恶性肿瘤之一，尽管仅占皮肤癌病例的5%，却造成了75%的相关死亡。这种高度异质性的肿瘤对传统治疗极易产生耐药性，患者中位生存期仅6-12个月。在肿瘤发生发展中，自噬（autophagy）扮演着复杂角色——既可促进肿瘤细胞存活，也能诱导自噬性细胞死亡（autophagic cell death）。作为营养感知和细胞生长的中枢调控者，mTORC1复合物是调控自噬的主要"闸门"，但其在黑色素瘤中的调控机制尚未完全阐明。

南方医科大学的研究团队通过分析四个黑色素瘤转录组数据集和TCGA数据库，发现LINC00622在黑色素瘤组织和细胞系中显著高表达。临床样本分析显示，LINC00622表达水平与Clark分期呈正相关。功能实验证实，LINC00622能促进黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭，同时抑制细胞死亡。机制研究发现，定位于细胞核的LINC00622通过与转录因子BTF3结合，增强RRAGD基因的转录表达。RRAGD作为Rag GTPases家族成员，可激活mTORC1信号通路，进而抑制ULK1和VPS34复合物介导的自噬。值得注意的是，LINC00622缺失诱导的自噬表现为典型的自噬性细胞死亡特征，包括空泡形成、细胞器丢失和内质网片段化等超微结构改变。该研究不仅阐明了LINC00622-BTF3-RRAGD-mTORC1轴在黑色素瘤进展中的关键作用，还为靶向自噬性细胞死亡的黑色素瘤治疗提供了新思路。相关成果发表在《Cell Death and Disease》杂志。

研究人员运用了RNA测序（RNA-seq）、RNA免疫共沉淀（RIP）、染色质免疫共沉淀（ChIP）、透射电镜等技术，并建立了裸鼠移植瘤模型。临床样本来自上海Wellbio公司的组织芯片和南方医科大学附属南方医院的手术标本。

LINC00622在黑色素瘤细胞和肿瘤中高度上调
通过分析GSE183878等四个数据集和TCGA数据库，发现LINC00622是黑色素瘤中最显著上调的lncRNA之一。qPCR和原位杂交证实其在黑色素瘤细胞系（A375和SK-MEL-28）和临床样本中高表达，且表达水平随Clark分期升高而增加。

LINC00622促进细胞增殖、迁移和侵袭
敲低LINC00622显著抑制黑色素瘤细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力，而过表达则产生相反效果。Sytox Green染色和电镜观察发现，LINC00622缺失诱导的细胞死亡可被自噬抑制剂3-MA和MHY1485完全阻断，提示其调控的是自噬性细胞死亡。

LINC00622定位于细胞核并调控mTORC1相关信号
FISH和细胞分级实验显示LINC00622主要定位于细胞核。RNA-seq分析发现敲低LINC00622后，RRAGD等mTORC1通路相关基因显著下调。GO和Reactome分析显示"mTORC1介导的信号"是最富集的通路。

LINC00622通过RRAGD调控mTORC1调节的自噬
实验证实LINC00622正调控RRAGD表达，影响mTOR（Ser2448）和S6K（Thr389）的磷酸化水平。敲低LINC00622增加LC3B-II积累和P62降解，促进LC3B焦点形成；而过表达则产生相反效果。自噬激活剂雷帕霉素可逆转LINC00622过表达对自噬的抑制。

LINC00622与BTF3结合并稳定其在RRAGD位点的结合
RNA pulldown联合质谱鉴定出BTF3是LINC00622的结合蛋白。RIP和共定位实验验证了二者的相互作用。ChIP-qPCR显示LINC00622通过维持BTF3在RRAGD启动子区的富集来调控其转录。过表达BTF3可挽救LINC00622敲低导致的表型。

体内实验验证LINC00622的抗自噬功能
裸鼠移植瘤实验表明，敲低LINC00622显著抑制肿瘤生长，伴随RRAGD下调、LC3B-II增加和mTORC1活性降低。免疫组化证实肿瘤组织中存在相同的分子变化。

这项研究首次揭示了LINC00622-BTF3-RRAGD轴在调控mTORC1介导的自噬性细胞死亡中的核心作用。从临床角度看，LINC00622的表达与黑色素瘤恶性程度正相关，可作为预后标志物；从治疗角度看，靶向该通路有望通过诱导自噬性细胞死亡来抑制黑色素瘤进展。特别是考虑到mTOR抑制剂（如雷帕霉素）在肿瘤治疗中的应用局限，靶向上游调控因子LINC00622或RRAGD可能提供更精确的干预策略。该研究为理解lncRNA在肿瘤代谢重编程中的作用提供了新视角，也为开发黑色素瘤的联合治疗方案奠定了理论基础。