摘要: 基于血清移行成分、网络药理学与实验验证策略探究土茯苓七味散(Tufuling Qiwei powder,TFLQW)治疗溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的活性成分及作用机制。利用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)构建UC小鼠模型,灌胃给予不同浓度的TFLQW,采用ELISA法检测小鼠血清中的炎症因子水平,并对小鼠结肠组织进行HE染色及病理学组织评分,确定了TFLQW能够减轻UC小鼠的炎症表型。随后,利用高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive-MS)技术对TFLQW血清移行成分进行鉴定,经谱库检索、质谱识别流程,辨识获得20种血清移行成分。利用Swiss Target Prediction数据库对血清移行成分进行作用靶点预测;在疾病数据库GeneCards、OMIM、DisGeNet中检索UC疾病靶点;用Venny 2.1.0软件绘制韦恩图得到交集靶点113个。利用Cytoscape 3.8.0软件构建“药物-成分-靶点-疾病”网络,使用Centiscape 2.2插件筛选核心成分,TFLQW中的巴马汀、表小檗碱、药根碱、小檗碱、漆黄素、白藜芦醇等成分可能是发挥药效的活性物质。利用String数据库分析蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI),并筛选得到关键靶点,TFLQW通过干预STAT3、PIK3R1、SRC、PIK3CA、MAPK1和AKT1等靶点发挥治疗UC的作用。David数据库对交集靶点进行GO富集分析和KEGG通路分析,发现TFLQW治疗UC的通路主要涉及癌症、PI3K/AKT、C型凝集素受体等信号通路。对关键靶点和核心成分进行分子对接,发现PIK3CA与各活性成分结合较好。利用Western blot法检测小鼠结肠组织中PI3K/AKT信号通路蛋白表达情况。本研究初步确证了TFLQW改善UC的作用,并初步鉴定了TFLQW治疗UC的潜在药效成分及其作用通路,并完成了体内实验验证。本研究为该复方的药效物质基础及作用机制深入研究提供参考,也为TFLQW的临床用药提供理论支撑。动物福利和实验过程获得内蒙古医科大学医学伦理委员会批准(伦理审批号:YKD202302093)。
