转基因β-葡萄糖醛酸苷酶介导的化学发光免疫分析法：实现尿醛固酮自动化快速检测的新策略

为解决24小时尿醛固酮检测中手工处理效率低、缺乏标准化诊断阈值的问题，研究人员开发了一种整合转基因IMCS-RT β-葡萄糖醛酸苷酶水解与化学发光免疫分析（CLIA）的自动化系统。该技术仅需30分钟完成水解，检测线性范围达0.030–40.00 ng/mL，与LC-MS/MS高度一致（r>0.98），并确立15.28 μg/24h的诊断截断值（AUC=0.80），为原发性醛固酮增多症（PA）提供非侵入性诊断方案。

　　

高血压人群中，约5-24%的患者受原发性醛固酮增多症（PA）困扰，这种疾病可引发顽固性高血压、低钾血症甚至心血管事件。尽管血浆醛固酮与肾素比值（ARR）是当前PA筛查的主要手段，但其结果易受药物、体位等因素干扰，且缺乏统一诊断阈值。相比之下，24小时尿醛固酮检测能更稳定反映醛固酮分泌状态，但传统酸水解需18小时处理，而酶水解联合液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）又存在成本高、自动化程度低的瓶颈。

北京协和医院等机构的研究人员创新性地将转基因酶水解技术与化学发光免疫分析（CLIA）平台结合，开发出全自动尿醛固酮检测系统。研究首先对比了盐酸、生物源酶和转基因酶的水解效率，发现IMCS-RT β-葡萄糖醛酸苷酶在室温下30分钟即可完成水解，效率显著优于传统方法。基于此优化的酶解条件，团队构建了包含磁性分离、抗体捕获和化学发光反应的自动化检测体系，其检测下限达0.030 ng/mL，与LC-MS/MS结果高度吻合（相关系数>0.98）。通过85例PA患者和187例对照的队列分析，确立15.28 μg/24h的诊断截断值，为临床提供客观标准。该成果发表于《Analytica Chimica Acta》，标志着PA诊断向高效自动化迈出关键一步。

关键技术方法

研究采用四种β-葡萄糖醛酸苷酶（包括转基因IMCS-RT）对比水解效率，通过化学发光免疫分析平台整合磁珠分离技术，以LC-MS/MS为金标准进行方法学验证，并基于272例临床样本建立ROC曲线确定诊断阈值。

研究结果

1. 水解方法优化：IMCS-RT转基因酶在25°C下30分钟水解效率达峰值，较酸水解时间缩短97%，且较其他酶制剂释放更多醛固酮（如某样本从0.73 ng/mL提升至9.54 ng/mL）。

2. 方法学验证：CLIA系统在0.030–10.00 ng/mL范围内线性优异（R²=0.996），与LC-MS/MS的酸水解（r=0.9836）和酶水解（r=0.9846）结果高度一致。

3. 临床诊断价值：新确立的15.28 μg/24h截断值使PA诊断灵敏度达0.776，特异性0.706，曲线下面积（AUC）为0.80。

结论与意义

该研究首次实现尿醛固酮从样本处理到检测的全流程自动化，将传统18小时流程压缩至1小时，同时通过转基因酶技术突破水解效率瓶颈。方法特异性诊断阈值的建立弥补了现有指南的空白，为PA筛查提供标准化非侵入性方案。值得注意的是，该系统采用的IMCS-RT酶在室温下的稳定活性显著降低实验室间变异，其与SNIBE化学发光平台的兼容性更利于临床推广。这些突破不仅提升PA诊断效率，也为其他激素检测的自动化开发提供范式。