基于OmpU1-LptDEP表位融合抗原的新型减毒活疫苗在水产弧菌病防控中的研发与应用

为解决水产养殖中弧菌病爆发造成的重大经济损失问题，研究人员创新性地采用表位融合策略，以减毒副溶血弧菌VP3株为载体，构建了表达OmpU1-LptDEP融合抗原的两种候选疫苗VP5p（质粒表达）和VP6（染色体整合）。通过浸浴免疫成功诱导先天和适应性免疫应答，对野生型副溶血弧菌攻击提供75%和60%的相对存活率，细菌载量降低1-2个数量级，为水产疫苗开发提供了新范式。

　　

全球水产养殖业正面临弧菌病爆发的严峻挑战。随着养殖密度增加，由副溶血弧菌(V. parahaemolyticus)等病原体引起的疾病每年造成超过90亿美元损失，其中急性肝胰腺坏死病(AHPND)可导致对虾100%死亡率。抗生素滥用加剧了耐药性问题，促使世界卫生组织(WHO)将水产耐药性列为全球健康威胁。传统灭活疫苗存在免疫保护期短、需注射接种等缺陷，亟需开发新型疫苗解决方案。

浙江理工大学521人才计划团队在国家自然科学基金等项目支持下，创新性地将LptD蛋白的四个表位肽段(LptD^EP)与截短的OmpU(OmpU1)融合，利用已构建的减毒副溶血弧菌VP3株（缺失溶血素基因tdh和III型分泌系统T3SS1/2关键基因vcrD1/2）作为载体，开发了两种候选疫苗：质粒表达的VP5p和染色体整合的VP6。研究采用浸浴免疫方式，通过qPCR检测免疫相关基因表达，测定血清酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性，并开展攻毒保护实验评估疫苗效果。

【成功构建质粒型融合抗原表达菌株】通过分子克隆技术将OmpU1-LptD^EP融合基因插入表达载体pBBR1MCS-1，转化至VP3获得VP5p。Western blot证实融合蛋白正确表达，连续传代验证质粒稳定性达98%。

【染色体整合型疫苗构建】利用同源重组将表达盒整合至VP3染色体pir位点获得VP6株，PCR和测序验证正确插入，传代实验显示遗传稳定性达100%。

【免疫保护效果评估】浸浴免疫后，VP5p和VP6组脾脏和肝脏中mhc1α、il1b等免疫基因显著上调，血清ACP和AKP活性提高。攻毒实验显示VP5p和VP6的相对存活率(RPS)分别达75%和60%，显著高于亲本VP3株的45%，且组织细菌载量降低1-2个数量级。

该研究开创性地将表位融合策略应用于水产减毒活疫苗开发，解决了LptD天然低表达的难题。OmpU1作为载体既增强了抗原呈递效率，又保留了LptD^EP的免疫原性。VP5p和VP6疫苗兼具遗传稳定性与高效保护力，其浸浴接种方式特别适合大规模水产养殖应用。论文发表在《Fish》期刊，为水产弧菌病防控提供了安全有效的新方案，对减少抗生素使用、促进可持续水产养殖发展具有重要意义。