RNA适配体REPORA-6b的筛选表征及其在促红细胞生成素(EPO)捕获检测中的应用研究

本研究针对运动员滥用重组促红细胞生成素(EPO)的兴奋剂检测难题，通过SELEX技术成功筛选出特异性靶向EPO蛋白结构域的RNA适配体REPORA-6。经优化获得截短体REPORA-6b，其结合亲和力达22±2 nM，建立的捕获检测体系灵敏度达19.6 pM，为反兴奋剂检测提供了新型分子识别工具。该成果突破传统抗体检测的局限性，发表于《Talanta》期刊。

　　

在竞技体育领域，促红细胞生成素(EPO)的滥用始终是反兴奋剂工作的重点难点。这种34 kDa的糖蛋白激素能显著提升运动员携氧能力，但非法使用会导致血液粘稠等致命风险。传统检测依赖单克隆抗体，存在制备繁琐、批次差异大等缺陷。为此，马来西亚理科大学(Universiti Sains Malaysia)的研究团队在Tang TH和Citartan M的带领下，开发了新型RNA适配体检测技术，相关成果发表在分析化学权威期刊《Talanta》上。

研究采用SELEX(指数富集配体系统进化)技术进行11轮筛选，结合乙基亚硝基脲(ENU)足迹法和分子对接等关键技术。从初始文库中分离出靶向EPO蛋白结构域的REPORA-6适配体，其解离常数(K_d)为25±1 nM。研究发现该适配体可识别不同糖基化变体(Epoetin Beta和Mircera)，通过截短优化获得性能更优的REPORA-6b(K_d=22±2 nM)。

【材料与方法】
研究使用重组人EPO-α(rHuEPO-α)作为靶标，通过硝化纤维素膜过滤结合法进行筛选。采用T7转录系统扩增RNA库，AMV逆转录酶进行核酸转换。结合位点分析采用ENU化学修饰和在线探针切割实验。

【In Vitro Selection】
经过11轮SELEX筛选，团队获得高亲和力RNA适配体。实验证实REPORA-6能结合去糖基化EPO，表明其识别表位位于蛋白核心区域。

【Conclusion】
最终构建的适配体捕获检测体系灵敏度达19.6 pM，显著优于传统抗体检测法。该技术为兴奋剂检测提供了稳定、可标准化的新型分子探针。

这项由Ahmad Naqib Shuid、Marimuthu Citartan等学者完成的研究，首次实现了RNA适配体在EPO兴奋剂检测中的实际应用。其创新性在于：突破糖基化差异对检测的干扰，建立可识别多种EPO类似物的通用检测平台；通过适配体截短策略提高亲和力；开发出满足反兴奋剂检测要求的超灵敏分析方法。研究成果为体育公平竞争提供了新的技术保障，也为其他糖蛋白检测提供了方法学参考。