禽白血病病毒J亚群p15蛋白通过靶向干扰素调节因子7抑制cGAS-STING信号通路促进病毒复制的机制研究

本研究揭示了禽白血病病毒J亚群(ALV-J)编码的p15蛋白通过其酶活性位点(37D,38S)与干扰素调节因子7(IRF7)的DNA结合域(DBD)相互作用，抑制IRF7二聚化及核转位，从而拮抗cGAS-STING信号通路介导的IFN-β产生，为ALV-J免疫逃逸机制提供了新见解，并为抗病毒药物研发提供了潜在靶点。

　　

ABSTRACT

禽白血病病毒J亚群(ALV-J)作为最具致病性的禽逆转录病毒之一，可通过抑制宿主先天免疫反应促进肿瘤发生。最新研究发现其编码的p15蛋白酶能特异性靶向干扰素调节因子7(IRF7)，通过独特机制拮抗cGAS-STING信号通路。在DF-1细胞模型中，p15通过其关键酶活性位点37D和38S与IRF7的DNA结合域相互作用，显著抑制IRF7二聚化及核转位，但不影响其磷酸化过程，最终导致IFN-β表达下调。该发现为理解ALV-J免疫抑制机制提供了新视角。

INTRODUCTION

先天免疫系统通过模式识别受体(PRRs)如cGAS识别病毒DNA，激活STING-TBK1-IRF7信号轴诱导IFN-β产生。多种病毒已进化出逃逸该通路的策略，但ALV-J的免疫逃逸机制尚未明确。前期研究显示ALV-J可抑制IκBα磷酸化和MDA5表达，但其对cGAS-STING通路的影响仍是未解之谜。

RESULTS

ALV-J抑制cGAS-STING通路激活
病毒感染实验显示ALV-J显著抑制cGAS/STING共转染诱导的IFN-β启动子活性，使IRF7 mRNA水平下降约60%，但未影响cGAS蛋白表达。双荧光素酶报告系统证实该抑制作用具有时间依赖性。

p15酶活性位点的关键作用
在10种病毒蛋白筛选中，仅p15表现出显著抑制效应。点突变实验证实37D和38S构成的酶活性中心不可或缺：p15-D37A_S38A双突变体丧失对IFN-β的抑制能力，且无法切割gag-pol前体产生成熟p27蛋白。

IRF7靶向抑制机制
共免疫沉淀显示p15与IRF7存在物理相互作用，主要结合于IRF7的1-239aa区域。非变性电泳证实p15使IRF7二聚体比例降低75%，激光共聚焦观察到核内IRF7荧光强度减少约50%。值得注意的是，p15不影响IRF7的Ser477/479位点磷酸化。

病毒复制促进效应
siRNA敲低p15使IFN-β表达恢复2.3倍；而过表达p15使病毒滴度(TCID₅₀)提升10²倍，证实其促复制功能。酶活性突变体则丧失该效应，表明抑制作用与蛋白酶功能直接相关。

DISCUSSION

该研究首次阐明ALV-J通过p15-IRF7互作逃逸先天免疫的新机制。与HSV-1 VP22直接抑制cGAS酶活性不同，p15独创性地靶向IRF7二聚化环节。其作用模式与MDV VP23相似但更具特异性——仅影响IRF7而不干扰TBK1活化。值得注意的是，p15在ALV各亚群中高度保守，提示该机制可能普遍存在。

MATERIALS AND METHODS

实验采用ALV-J JS09GY3株感染DF-1细胞系，通过双荧光素酶报告系统、非变性PAGE、激光共聚焦等技术进行分析。关键试剂包括鸡源cGAS/STING表达载体、p15点突变体及IRF7截短体，所有数据经三次独立实验验证。