鹟科鸟类中Haemoproteus寄生虫组织期表型变异及其对血孢子虫分类学的启示

本研究针对Haemoproteus寄生虫在自然宿主中的组织期发育模式不明确问题，通过组织学、原位杂交和激光显微切割技术，首次揭示H. balmorali同时存在裂殖体(meronts)和巨型裂殖体(megalomeronts)的表型变异，挑战了传统以宿主细胞核肥大作为Leucocytozoon鉴别特征的观点，为血孢子虫分类学和致病机制研究提供新见解。

　　

在鸟类寄生虫研究领域，Haemoproteus属血孢子虫（Haemosporida）因其复杂的生命周期和多样化的宿主适应性备受关注。这类寄生虫在组织中发育的裂殖体阶段存在显著形态差异，可分为小型裂殖体（meronts）和巨型裂殖体（megalomeronts）两种类型。然而，关于不同物种是否固定发育其中一种形态，或是存在表型可塑性，以及这些特征在分类学中的价值，长期存在争议。更棘手的是，宿主细胞核肥大现象传统上被认为是Leucocytozoon属的特征，但近期研究暗示这可能存在例外。

维也纳兽医大学（University of Veterinary Medicine Vienna）的研究团队选择欧洲斑鹟（Ficedula hypoleuca）和红胸鹟（Ficedula parva）这两种亲缘关系密切但越冬地不同的鹟科鸟类作为研究对象，通过多学科技术手段揭示了Haemoproteus组织期发育的惊人多样性。这项发表在《International Journal for Parasitology》的研究不仅首次报道了H. balmorali在同一宿主中同时发育两种裂殖体形态的现象，还挑战了血孢子虫分类的传统形态学标准。

研究人员采用PCR和血涂片镜检筛选自然感染的鸟类，对阳性个体进行组织学检查。通过特异性原位杂交（CISH/FISH）和激光显微切割（LCM）技术实现组织期寄生虫的分子鉴定，并基于细胞色素b基因（886 bp）构建系统发育树。免疫组化（IHC）用于确定寄生虫的宿主细胞定位，图像分析软件定量测量裂殖体形态特征。

研究结果部分，"鹟科鸟类中Haemoproteus感染的一致检测"显示，所有8只F. hypoleuca和2只F. parva均通过分子和镜检确认感染，包括H. balmorali hCOLL3、H. pallidus hPFC1和H. majoris hPHSIB1等谱系。值得注意的是，血涂片中三种寄生虫的配子体可通过沃尔廷颗粒(volutin granules)等特征明确区分。

"Haemoproteus物种展示不同的组织期发育"部分包含三项重要发现：首先，在H. balmorali感染的F. hypoleuca中同时检测到裂殖体（34.4±13.4 μm）和巨型裂殖体（45.0±23.7 μm），后者表现出显著的宿主细胞核肥大——这一传统认为的Leucocytozoon特征。通过谱系特异性探针和LCM证实两者均属于hCOLL3谱系，首次证明Haemoproteus存在表型变异。其次，在F. parva中首次记录到H. majoris hPHSIB1的巨型裂殖体（最大达842 μm），主要存在于砂囊，其厚壁（8.1±2.2 μm）与网状结构具有物种特异性。第三，H. pallidus感染的鸟类虽呈现配子体血症却未发现组织期阶段，提示其裂殖生殖周期可能与配子体发生不同步。

"系统发育分析"显示，裂殖体形成物种主要聚集在一个支系（支持率98/0.73），而巨型裂殖体形成物种则分散在不同分支。值得注意的是，H. balmorali与仅形成裂殖体的近缘种H. attenuatus（遗传距离2.25%）构成高支持分支（100/1.0），表明表型变异可能发生在近缘物种间。

这项研究的突破性发现对血孢子虫生物学具有多重意义：首先，H. balmorali在同一自然宿主中同时发育两种裂殖体形态，证明Haemoproteus存在迄今未知的表型可塑性。其次，宿主细胞核肥大的发现挑战了该特征作为Leucocytozoon诊断标准的传统观点，提示分类学需结合分子证据。第三，不同物种组织期发育模式的差异（如H. pallidus缺乏同步组织期）反映了Haemoproteus属内复杂的生活史策略。这些发现不仅为血孢子虫分类提供新视角，也为理解宿主-寄生虫共进化机制奠定基础。

从技术层面看，研究成功将LCM与长片段PCR结合应用于福尔马林固定组织，为追溯自然感染中寄生虫发育轨迹建立新方法。系统发育分析揭示的形态-基因型关联，则为预测未研究物种的发育模式提供框架。未来研究需扩大样本量和物种范围，特别是探究表型变异的分子机制及其在寄生虫传播中的作用。