Clathrin轻链B（CLTB）通过双重机制驱动肝细胞癌进展：小细胞外囊泡介导的血管生成与NF-κB–PCLAF信号轴

本研究揭示了Clathrin轻链B（CLTB）在肝细胞癌（HCC）中的双重促癌机制：一方面通过NF-κB–PCLAF信号轴增强小细胞外囊泡（sEV）摄取促进肿瘤增殖，另一方面通过sEV-CLTB靶向SH3KBP1抑制其泛素化降解，诱导血管异常重塑。研究为HCC联合治疗提供了新靶点，尤其展示了氯丙嗪（CPZ）或SH3KBP1沉默与索拉非尼联用的协同抑瘤效果。

　　

CLTB在HCC中的表达特征与临床意义

多组学分析显示，CLTB在HCC组织中显著高表达，且与患者不良预后相关。TCGA和GEO数据库联合分析证实，CLTB在HCC中的表达水平较正常肝组织升高约2.5倍（p < 0.001）。临床队列中，75%的HCC病例呈现CLTB强阳性染色，58.3%的肿瘤组织CLTB表达显著高于癌旁组织。免疫组化进一步显示，CLTB高表达与肝硬化显著相关（p = 0.047），提示其可能参与肝炎-肝硬化-肝癌的恶性转化进程。

CLTB通过NF-κB–PCLAF轴促进HCC恶性表型

蛋白质组学筛选发现，CLTB敲除导致PCLAF（PCNA钳相关因子）表达显著下调。机制研究表明，CLTB通过激活IκBα/p65磷酸化增强NF-κB信号通路，进而转录上调PCLAF表达。功能实验显示，PCLAF敲除可逆转CLTB过表达诱导的细胞增殖（CCK-8检测活力下降42%）、迁移（Transwell细胞数减少68%）和sEV摄取（PKH26荧光强度降低55%）等恶性表型。染色质免疫沉淀（ChIP-qPCR）证实NF-κB p50亚基直接结合PCLAF启动子区域-985至-975 bp位点，荧光素酶报告基因实验验证该位点对转录激活的关键作用。

sEV-CLTB通过SH3KBP1调控血管异常重塑

透射电镜和纳米颗粒追踪（NTA）证实HCC细胞分泌的sEVs直径集中在100-150 nm，富含CLTB蛋白（较THLE-2来源sEVs高3.2倍）。体外实验显示，sEV-CLTB可增强人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的管腔形成能力（分支点数增加2.3倍）和球体出芽长度（增加180%），同时破坏内皮屏障完整性（TMR-葡聚糖泄漏量增加2.5倍）。质谱分析发现SH3KBP1是sEV-CLTB的关键作用靶点，免疫共沉淀和GST pull-down证实两者直接结合。机制上，sEV-CLTB通过竞争性抑制CBL介导的SH3KBP1单泛素化（半衰期从4.5小时延长至9.2小时），阻止其蛋白酶体降解，从而持续激活促血管信号。

靶向干预的临床转化价值

在患者来源异种移植（PDX）模型中，氯丙嗪（CPZ）抑制CLTB可使肿瘤体积缩小47%，联合索拉非尼后抑瘤率达72%。AAV-shSH3KBP1病毒治疗同样显著降低肿瘤微血管密度（CD31⁺面积减少61%）和增殖指数（Ki67⁺细胞下降54%）。肺血管渗漏模型显示，CLTB过表达sEVs使德克萨斯红-葡聚糖扩散面积增加3.8倍，而SH3KBP1敲除可完全阻断该效应。

研究局限与展望

尽管研究阐明了CLTB在HCC中的双重作用机制，但尚需解决以下问题：①临床样本需扩大至多中心队列以验证CLTB的普适性诊断价值；②PDX模型未能完全模拟人类免疫微环境相互作用；③CPZ的中枢神经系统副作用需通过药物改造优化。该研究为开发针对CLTB/SH3KBP1通路的联合治疗方案提供了理论依据，特别是对索拉非尼耐药患者具有重要转化意义。