
-
生物通官微
陪你抓住生命科技
跳动的脉搏
Strip-EZ™ System[新品推荐]
【字体: 大 中 小 】 时间:2000年06月27日 来源:生物通
编辑推荐:
该系统是专门为需要在同一张膜上反复标记检测不同信号的用户而设计的。比如Clontech公司的cDNA Expression Array,RNA Master Blot, Multiple Tissue Northern(MTN) Blot这一类带多个基因信息的膜,由于一次杂交即可获得有关样品的多种信息,因而价格也相对较为昂贵,用常规的方法处理(常规探针杂交,0.1% SDS 煮沸洗脱)通常只可反复使用3-5次,而如果采用Strip-EZ System合成标记探针来杂交,则可以在非常温和的条件下(试剂由试剂盒提供)洗脱原有的杂交信号,减轻对膜的伤害,提高膜的使用寿命。数据表明经过9-15次反复洗脱后的膜依然能得到清晰的杂交信号(右图,左边为STRIP-EZ标记探针,右边为普通探针,膜经过1,3,5,10,15轮反复杂交-洗脱-再杂交后检测信号)。
该系统的工作原理在于合成探针的同时掺入经修饰过的脱氧核苷酸(这种修饰不会影响探针的杂交特性),探针与膜经过杂交、检测后可以将膜浸入Probe Degradation Buffer中10分钟,修饰过的脱氧核苷酸降解,探针即被降解寡核苷酸碎片,再在68℃下温和地洗脱,膜即可再生。该系统合成的DNA或RNA探针适用于Northern, Southern, dot/slot及相关的印迹,共有4种试剂盒:
Strip-EZ RNA Stripable RNA Prboe Synthesis & Removal Kit
RNA探针灵敏度非常高,由于RNA探针相比DNA探针能形成更稳定的探针—模版复合物,不象双链DNA探针那样存在探针互补链的干扰,且合成探针的DNA模版可以用DNase I消化,更增加了探针的特异性,因而比RANDOM-PRIMED DNA探针灵敏度提高10倍以上。RNA探针要求更严谨的杂交条件和洗膜条件,其背景也大为降低。尽管如此,由于RNA探针与模版形成的复合物很稳定,难以洗脱,几乎不能重新标记膜,因而很少用于Gene Array这类膜上。
Strip-EZ RNA Stripable RNA Prboe Synthesis & Removal Kit结合了Strip-EZ技术和体外转录技术,合成的RNA探针既有很高的灵敏度,极低的背景,又能在温和的条件下被洗脱除去,减少杂交膜再生时对膜的损伤,从而延长膜的使用寿命,降低使用成本。试剂盒提供了除标记物和模版之外的合成探针及洗脱探针所需的所有试剂,非常方便。根据模版上所带的SP6,T7,T3启动子,可以选择相应的试剂盒。另外值得一提的是这种试剂盒既适合用于同位素标记,也适用于非放标记,可满足不同的需要。试剂盒提供足够的试剂供30次反应用,每次合成0.5ug的探针,适用于Northern, Southern或其他相关的核酸杂交实验。
Strip-EZ RT STRIPABLE DNA Probe Synthesis & Removal Kit
Strip-EZ PCR STRIPABLE DNA Probe Synthesis & Removal Kit
用PCR的方法制备探针的优点之一在于模版既可以是克隆序列、cDNA,又可以是PCR产物,没有特别要求。这个试剂盒采用不对称PCR技术和Strip-EZ技术使得到的产物大部分为单链探针,另一条链比例很小,因而在杂交过程中不会出现竞争性抑制。制备的探针比RANDOM-PRIMED DNA探针灵敏3-5倍,同样可以在温和的条件下被洗脱,可用于Southern,Northorn及各种核酸杂交。试剂盒提供了除模版、标记物、Tap酶之外的所有合成探针(30次)及洗膜所需试剂,包括M13正反向及T7引物(也可以自备引物)。
Strip-EZ DNA STRIPABLE DNA Probe Synthesis & Removal Kit
这是一个采用RANDOM-PRIMED技术和Strip-EZ技术制备双链DNA探针的试剂盒 。只需10分钟可以完成标记反应,简单,快速。特有Random Sequence Decamers(10碱基随机引物序列),比Random Hexamer(6碱基随机引物序列)更有效提高模版—引物间的稳定性,减少随机引物形成的双体,提高探针的灵敏度。试剂盒提供除模版和标记物之外全部所需试剂,合成的探针同样可以被温和地降解去除。配合ULTRAhyb™使用可增加探针灵敏度达100倍。