cDNA Array和Northern杂交的非同位素之选[新品推荐]

    Clontech公司新推出的SpotLight化学发光试剂盒助你彻底从同位素中解放出来，让你轻松快速、高灵敏度地进行各种尼龙膜基质的杂交印迹和Array的检测。两种标记试剂盒适应不同的研究需要，配合通用的杂交检测试剂盒，即可组合出完整的非放射性检测分析系统。

    Atlas SpotLight标记试剂盒是专为Clontech公司的Atlas cDNA Array而设计的。Altas cDNA Array可以说是基因芯片的雏形，或者可以称之为Macroarray：在一张12x8大小的尼龙膜上按一定的规则点有1176个基因，将两份样品制备成核酸探针，分别与两张同样的膜进行杂交，比较对应位置上信号的差异就可以得到在这两个样品中这1000多个基因差异表达的情况。由于Atlas cDNA Array具有和基因芯片一样高信息量的优点，但却不需要特殊昂贵的仪器（芯片要特殊的读片机），还可以反复使用5—15次（芯片不能重复使用），价格比较适中（比如1万7一个试剂盒，有4张完全一样的膜，平均4千3一张膜（1176个基因），也就是说每个基因平均不到4块钱，如果按反复使用5次计算，每次每个基因还不到8角，另外试剂盒还提供实验用的部分关键试剂），因而受到一般实验室的欢迎。

    但是由于膜上每个点的核酸量有限，所以对标记的灵敏度要求非常高，一般情况下同位素是首选。如今Atlas SpotLight标记试剂盒特别提供逆转录所需的试剂，可以将50ng以上的RNA样品制备成生物素标记的单链cDNA探针，由于没有竞争性抑制，单链探针的灵敏度要大大高于双链探针。另外生物素标记的探针比32P标记的探针要稳定，可以在半年内多次重复使用。需要特别指出的是由于点在膜上的核酸量有限，Clontech公司特别筛选了每个cDNA特异性最高的片断（长度在400—600个碱基之间，这样可以避免由于cDNA长短不一引起的杂交条件的差异以及由于基因之间存在部分同源区引起的信号交叉）点在Array膜上，因此Atlas cDNA Array试剂盒中附带了对应这些片断的引物混合物以作为标记引物（而不是随机引物），这样同样可以提高反应的特异性，避免其它的非特异性干扰。因此标记探针时应尽量用试剂盒提供的引物，当然在引物用完的情况下也可以用随机引物代替，但会影响灵敏度。

    对于Southern、Northern和多组织Northern预制杂交膜（MTN）、多组织表达矩阵（MTE）等以尼龙膜为基质的杂交、印迹反应，可以选用SpotLight随机引物标记试剂盒进行标记，和同位素标记一样简单，但却更加安全、容易处理，而且生物素标记的探针稳定时间更长。

    配套通用的杂交检测试剂盒里提供特殊配方的SpotHyb杂交液，能有效降低背景，减少非特异杂交，提高灵敏度，减少非放射性检测方法常见的问题。HRP耦联的Streptavidin能高效专一地结合生物素标的探针。采用了加强型的化学发光试剂，信号强且发光信号可以持续6小时之久，通常压片5—10分钟，一旦结果不理想，允许反复压片。相比同位素需要压片过夜，SpotLight让你当天就得到实验结果，可谓安全、方便、快速多了；而相比化学显色法一旦显色过度就不可逆转且膜不可重复使用，这种方法也同样优越，特别是灵敏度要高的多，信号更清晰、干净。

实际上这套试剂盒本身并没有什么特别新的技术，但是经过优化后的，非同位素检测也可以用于象Atlas cDNA Array、MTN Blot、MTE Array这样一些灵敏度要求很高的实验中，今后决定选择同位素、非放射性检测时灵敏度不再是决定因素，这本身也代表了实验技术的进步。