新型的高通量转录因子分析[新品推荐]

在转录因子的研究中，凝胶迁移分析（EMSA）是比较常用的方法，但是EMSA 操作相当繁琐。为此，美国Signosis 公司开发出一种新型的滤板法检测试剂，能高通量地检测转录因子的活性。目前已有48种转录因子的滤板法检测试剂，包括NFkB、STAT3、AP1、ER等。

在分子生物学领域，转录因子（transcription factor，简称TF）的研究一直是热点，因为它们的重要性不言而喻。转录因子通过与基因上游启动子区中特异的DNA序列发生相互作用，来决定被调控基因的开启和关闭以及表达量。一个转录因子可调控数百个基因的表达，而一个基因的表达又可受数个转录因子的调控。转录因子的结构和功能缺陷，与人类的一些疾病（如肿瘤和炎症）相关。因此，转录因子活性的检测对疾病的研究以及药物开发都有重大意义。

在转录因子的研究中，凝胶迁移分析（EMSA）是比较常用的方法，但是EMSA 操作相当繁琐，整个过程包括了核蛋白的抽提、定量，探针的标记与纯化，探针与蛋白质的结合，电泳与显影等若干步，且每次只能检测一个转录因子。为此，美国Signosis 公司开发出一种新型的滤板法检测试剂，能高通量地检测转录因子的活性。目前已有48种转录因子的滤板法检测试剂，包括NFkB、STAT3、AP1、ER等。

下面我们NFkB为例，说说这种滤板法检测的流程（如下图）。首先，将生物素标记的特异探针与核抽提物混合，形成转录因子-DNA复合物。滤板用于保留NFkB结合的DNA探针，除去游离的DNA探针。结合的预标记的DNA探针随后从滤板洗脱和收集，通过DNA板杂交进行定量分析。捕获的DNA探针进一步用辣根酶标记的链霉亲和素检测，在微孔板发光检测仪上读取发光度值（RLUs）。

这是一种高通量的检测方法，可同时分析多个标本，而且它较非放射性凝胶迁移实验更简单更快速，与基于P32的凝胶迁移实验相比，又安全得多。这种检测方法费用低廉，与基于ELISA的检测方法相比花费更少。索取说明书及报价

除了这种滤板法检测试剂，美国Signosis 公司还提供了转录因子活性检测的微孔板阵列试剂，能同时检测48种不同转录因子的活性，包括NFkB、AP1、HIF1和p53等。在本方法中，根据转录因子-DNA结合位点的一致性序列，制备一系列生物素标记的探针。将探针混合物与核抽提物混合，形成转录因子/探针复合物，通过柱离心纯化，可以方便地与游离探针区分开来。板杂交之后，结合的探针从混合物中分离并分析。

这种微孔板阵列试剂操作简单，只需4步：探针孵育、柱离心、板杂交和HRP检测，也无需像Luminex那样的特殊仪器。单次实验就能测定48种转录因子的活性，非常高效。而且，可定量比较两个样本的差异。

此外，Signosis 公司也提供传统的转录因子凝胶迁移试验试剂。它是以预制的试剂盒提供，可检测50多种转录因子，且生物素预标记的探针都已制备好，用户无需制备探针。这个试剂盒是基于化学发光检测，避免了使用同位素的风险。因此，使用起来也颇为简单。

对于细胞内转录活性的定量测定，Signosis公司还提供了一系列载体——pTF-Luc报告载体。每个载体都含有cis因子（DNA结合序列）和萤光素酶基因。当转录因子激活，它与cis因子结合，诱导萤光素酶基因的表达。因此萤光素酶的活性体现了转录因子的活性。通过比较2份样品的萤光素酶活性，可定量测定转录因子是上调还是下调。这种载体还能转染到细胞内，构建表达报告基因的稳定细胞系。目前有20种报告载体可提供。

对于从事转录因子研究的您来说，选择还真不止EMSA这一个，新兴的滤板法转录因子检测不仅通量更高，且快速安全，是您的更佳选择。