山东大学生科院最新研究解析MCM

　　

生物通报道：来自山东大学生命科学学院，国家糖工程技术研究中心等处的研究人员通过对人MCM7N-端融合蛋白的原核表达、纯化，深入研究了其与AR蛋白相互作用，为了解MCMp蛋白家族的作用机制提供了重要的依据。

领导这一研究的是山东大学生科院顾黎博士，其早年毕业于延安医学院，科研方向为糖生物学和肿瘤细胞生物学，近年来所做工作主要包括CHO细胞表达糖基化干扰素，抗肿瘤糖基化药物研究，人糖基转移酶的单克隆抗体制备和糖脂脂质体研究等。

微小染色体维持蛋白(minichromosome maintenance proteins, MCMp)家族是一组与DNA复制有密切关系的蛋白，Mcm7是微小染色体维持蛋白家族成员之一，与其他的Mcm蛋白形成异多聚体,调节DNA的复制，它与转录成分关联，与RNA合成即转录有关，并且增殖细胞或组织高表达Mcm7，可以作为肿瘤生物标志的候选因子。

在这篇文章中，研究人员制备人MCM7 N-端的GST融合蛋白（GST-MCM7N），研究其是否和雄激素受体（AR）蛋白存在直接的相互作用。

首先研究人员利用RT-PCR获得长度为744 bp的人mcm7 基因N-端cDNA碱基片段，把该片段构建到原核表达载体pGEX-5x-3中，转化大肠杆菌BL-21菌株。经IPTG诱导菌株基因表达产生了GST-MCM7N融合蛋白，之后使用Glutathione Sepharose 4B球珠分离纯化。利用GST pull-down 技术把纯化的融合蛋白分别和前列腺癌细胞LNCaP细胞裂解液及基因工程获得的AR蛋白孵育，检测MCM7蛋白的 N-端是否和AR蛋白直接相互作用。

结果他们发现，酶切鉴定及基因测序表明，mcm7 基因cDNA的 N-端片段被构建到表达载体pGEX-5x-3中，另外SDS-PAGE及Western blotting结果分别显示这一研究获得了GST和GST-MCM7N融合蛋白，GST pull-down 结果证实GST-MCM7N和AR蛋白存在相互作用。研究人员认为MCM7蛋白的N-端和AR蛋白至少在体外可以发生直接的相互作用。

（生物通：万纹）

作者简介：

顾黎

教育和研究背景：

本科毕业于延安医学院临床医学专业，获医学学士学位（1997年）；硕士毕业于西安交通大学医学院病理学专业，获医学硕士学位（2000年）；博士毕业于北京大学医学部生物物理学专业，获理学博士学位（2003年），同年来山东大学生命科学学院工作，受聘讲师。2007年被评为副教授，2008年聘任为硕士生导师。科研方向为糖生物学和肿瘤细胞生物学，近年来所做工作主要包括CHO细胞表达糖基化干扰素，抗肿瘤糖基化药物研究，人糖基转移酶的单克隆抗体制备和糖脂脂质体研究等。以第一和通讯作者在国内外刊物上发表论文十几篇（其中SCI收录5篇），主持山东省中青年科学家科研奖励基金1项（2007-2009）；作为子课题负责人，参加国家973课题1项。工作期间已协助王鹏教授指导博士生2人、硕士生2人。

教学工作：

2004年起承担山东大学生命科学学院本科生《生物化学》理论课教学工作，2005年起参与本科生《糖生物化学》和研究生《糖生物学》的教学工作，承担部分章节的讲授任务。

近5年来发表的主要文章如下：

1、顾黎, 孔蕴, 刘围, 郜海涛, 郗日沫, 王鹏. 环丙沙星单克隆抗体的制备和性质鉴定, 科技通报，2010;26(1)（已接受）(核心期刊 )

2、郜海涛, 孔蕴, 王鹏, 顾黎（通讯）. 单糖类似物在糖基化研究和临床治疗中的应用进展,

中国生化药物杂志2009;30(6) （已接受）(核心期刊 )

3、 潘萌；孔蕴；陈畅；顾黎（通讯）. 单克隆抗体药物的研究进展. 中国生化药物杂志2008;29(1): 62-4

4、 Gu L, Tang Z, He D, Ka W, Sun D, Wen Z. Effects of TFAR19 gene on the in vivo biorheological properties and pathogenicity of mouse erythroleukemia cell line MEL. Sci China C Life Sci，2007 ;50(1):111-9. (SCI收录)

5、Zeng Z, Xu X, Zhang Y, Xing J, Long J, Gu L, Wang X, Sun D, Ka W, Yao W, Wen Z, Chien S.Tumor-derived factors impaired motility and immune functions of dendritic cells through derangement of biophysical characteristics and reorganization of cytoskeleton. Cell Motil Cytoskeleton. 2007;64(3):186-98. (SCI收录)

6、Chang Chen, Yanqiu Shi, Jing song, Qingsheng Qi, Li Gu （通讯）and Peng George Wang. Delivery of Nitric Oxide released from b-Gal-NONOate activation by b-Galactosidase and Its activity against Escherichia coli, Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2006;29(6):1239-41(SCI收录)

7、Shugung Wang, xiaohu Xu, LiGu.（通讯） Changes in the expression of c-fos and heat shock protein genes & blood flow velocity in the brain of rats undergoing myocardial ischemia/reperfusion， Indian J Med Res, 2006(123);131-8 (SCI收录)

8、Chang Chen, Yanqiu Shi, Song Li, Qingsheng Qi, Li Gu, Jing Song, Peng George Wang. A Glycosylated Nitric OxideDonor，b-Gal-NONOate，and its Site-specific Antitumor Activity. Arch. Pharm. Chem. Life Sci. 2006;339:366-71(SCI收录)

9、Xie L, Jiang Y, Yao W, Gu L, Sun D, Ka W, Wen Z, Chien S. Studies on the biomechanical properties of maturing reticulocytes. J Biomech. 2006;39(3):530-5.

10、Gu L, Xie L, Yao W, Ka W, Sun D, Wen Z. FTIR spectroscopy studies on the apoptosis-promoting effect of TFAR19 on the erythroleukemia cell line MEL. Sheng Wu Yi Xue Gong Cheng Xue Za Zhi. 2004;21(3):449-52. Chinese.