新型可见光凝胶透射仪分析微量DNA样本

　　

   近年来，DNA分析技术广泛应用于医学、法学、环境等诸多领域，成为科学研究的一大重点。例如法医学方面经常会对案发现场留下的头发、血斑等进行DNA 提取，然后进行pcr扩增验证，也有一些研究单位会对一些古老样本进行DNA提取，同样做pcr扩增验证。它们的相同之处在于，用于分析的样本DNA含量可能极其有限，稍有遗损就可能导致无法成功检测或者没有足够的样本DNA来满足再次检测的需要。因此如何对获得的极其微量的DNA样本进行准确的定量，成为目前相关学科关注的热点之一。然而目前微量DNA的检测方法灵敏度都不是很高，一些国外的高端仪器虽然检测时DNA样本量很少，一般2μl左右，但是当DNA样本浓度低于10ng/μl时，其检测数据就会出现较大误差。而由此导致的pcr扩增失败，就会对DNA样本造成损失，甚至导致样本枯竭。因此开发一种经济、简便、快速的检测手段显得十分重要与迫切。

    现在我们就探讨一下用北京百泰克生物技术有限公司的可见光凝胶透射仪及其升级版pgDetect微量核酸检测系统进行检测的方法。可见光凝胶透射仪其检测灵敏度为20pg/μl左右，pgDetect微量核酸检测系统其检测灵敏度为5pg/μl，采用工业级CCD摄像机，有配套定量分析软件；两款仪器DNA样本用量仅需1-2μl。

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其操作步骤如下：

1 准备试验样品及已知浓度的双链DNA，染料用SYBR Green I核酸染料.

2 标准品的浓度自行调整，一般双链DNA的终浓度在10-2000 pg/μL的条件下，可以得到好的线性关系。将标准品稀释至浓度为：1600，800，400，200，100，50，25 pg/μL及用于稀释标准品dsDNA的蒸馏水做空白对照，作为对标准品的浓度检测为例。

3 在透明管内进行操作，如可以使用PCR管或八连管等。将标准品与SYB Green Green I核酸染料等体积混匀（如2 μL dsDNA溶液与2μLGreen Green I核酸染料混匀）此时标准品dsDNA的终浓度为800，400，200，100，50，25，12.5，0 pg/μL，同时取待测样品2μL与2μLGreen Green I核酸染料混匀。试验操作完毕后，将反应管放在透射仪的蓝色显色板上，盖上暗箱,打开电源观测。此操作也可在蓝色板上铺一层透保鲜膜，将样品和染料直接点到保鲜膜上，这样透光更好，更有利于观察。

4 DNA浓度分析：
通过待测样品的亮度与已知浓度样品的亮度进行对比，可以基本准确的估测出待测样品的浓度。

举例说明：

北京大学的罗教授，在做古老动物分类方面的研究，经常要提取一些保存了上百年甚至更长的动物组织的DNA，如骨头，皮毛等。这些样品多是从博物馆中借的，非常珍贵。但是由于样品存放时间过长，导致其中大部分的DNA都已降解，只有少量DNA残留。这样在提取时一般只能获得很微量的DNA，提取DNA后要做PCR扩增保守序列然后再测序进行序列分析。但是由于缺乏微量DNA的检测手段，因此无法控制在PCR反应时模板DNA的加量，从而导致PCR失败，浪费了甚至比金子更珍贵的材料。在采用了百泰克生物技术有限公司的可见光凝胶投射仪后，该仪器可以检测到37pg/μL的DNA浓度。达到了实验室对DNA浓度的需求，从而可加入比较准确模板DNA的量，为PCR反应提供了支持。