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电泳达人候选:Native-PAGE须注意
【字体: 大 中 小 】 时间:2011年02月16日 来源:生物通
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凝胶电泳,虽是一项看似不起眼的技术,却也蕴藏着不少学问。如果你总结出了一些电泳技巧和经验,或者对核酸电泳/蛋白电泳有一些特别的心得体会,那么你就是我们要寻找的“电泳达人”啦。欢迎参加生物通举办的“电泳达人”评选活动。
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吉林省农科院的路杨与我们分享了Native-PAGE的注意事项。
1. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中,蛋白质的迁移率不仅和蛋白质的等电点有关,还和蛋白质的分子量以及分子形状有关,其中蛋白质的等电点是最重要的影响因子,要根据蛋白质的等电点来选择对应的电泳缓冲系统;
2. 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的过程中,要注意电压过高引起发热而导致蛋白质变性,所以最好在电泳槽外面放置冰块以降低温度;
3. 蛋白质的分子量较大,则电泳时间可以适当延长,以使目的蛋白质有足够的迁移率和其它的蛋白质分开,反之亦然。
4. 上样Buffer中没有SDS、DTT或2-ME之外,加入样品后不能加热。
5. 非变性凝胶电泳中,酸性蛋白和碱性蛋白的分离是完全不同的,不像SDS-PAGE中所有蛋白都朝正极泳动。非变性凝胶电泳中碱性蛋白通常是在微酸性环境下进行,蛋白带正电荷,需要将阴极和阳极倒置才可以电泳。
如果您也有类似的经验,欢迎积极参加。北京百晶生物技术有限公司为这次活动赞助了丰富的礼品。
活动页面:http://www.ebiotrade.com/custom/ebiotrade/DYDR/index.htm。