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电泳达人候选:核酸电泳经验谈
【字体: 大 中 小 】 时间:2011年02月18日 来源:生物通
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凝胶电泳,虽是一项看似不起眼的技术,却也蕴藏着不少学问。如果你总结出了一些电泳技巧和经验,或者对核酸电泳/蛋白电泳有一些特别的心得体会,那么你就是我们要寻找的“电泳达人”啦。欢迎参加生物通举办的“电泳达人”评选活动。
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西北农林科技大学的白耀富对核酸电泳有如下经验:
琼脂糖浓度 最佳线性DNA分辨范围(bp) 0.5% 1,000~30,000 0.7% 800~12,000 1.0% 500~10,000 1.2% 400~7,000 1.5% 200~3,000 2.0% 50~2,000
上表为实验室常用琼脂糖凝胶浓度与线性DNA的最佳分辨范围,但会因为琼脂糖质量不同而引起波动,要根据实际情况来定,推荐使用 invitrogen Agarose。
点样方法是将移液器对准点样孔,用另一只手帮助固定移液器,移液器枪头尖端进入点样孔即可将样品注入孔内,不可将尖插至孔底,以免将胶弄破。通常胶板或电泳槽中会有深色色带,增加对比度,来使加样方便。同时点上适合的DNA marker。
将电泳仪的正极与电泳槽的正极相连,负极与负极相连。核酸带负电荷,从负极向正极移动。电泳槽中电泳缓冲液与制胶用电泳缓冲液应相同,电泳缓冲液刚好没过凝胶 1mm为好,电泳缓冲液太多则电流加大,凝胶发热。电泳时所加电压一般不超过120v,电泳时间一般为3O~60 min,根据实验需要也可作适当调整。电压增高,电泳时间缩短,核酸条带相对来说不够整齐,不够清晰;相反,电压降低,电泳时间较长,核酸条带整齐清晰。另外,如果电泳后样品泳动很慢或者没泳动,请检查胶模两端的封口胶条是否已去掉。
如果您也有类似的经验,欢迎积极参加。北京百晶生物技术有限公司为这次活动赞助了丰富的礼品。
活动页面:http://www.ebiotrade.com/custom/ebiotrade/DYDR/index.htm。