创新参选：贴壁培养细胞MTT实验的改进

　　“赛默飞之生物通2012实验室创新技术大奖”评选活动开展以来，生物通已经陆陆续续收到不少项目，这些项目中有的能减少实验步骤，有的能降低实验成本，还有一些改进了实验设备，让我们的实验过程更加轻松。

生物通将会陆续公布一些项目，以便大家分享这些创新技术。同时为了感谢这些分享实验技巧的参选者，生物通也准备了一些精美礼品寄出，同时近期我们还将进行抽奖，以飨读者。

参选项目：贴壁培养细胞MTT实验的改进

背景：MTT实验广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。活细胞内线粒体的脱氢酶可以将MTT还原生成结晶状的深紫色结晶formaza，之后被溶剂DMSO完全溶解，最后通过酶标仪测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。 我们一般使用96孔板进行检测，在加完MTT反应2-4小时后，须将孔内培养液尽量吸干净，再加DMSO溶解formaza。没有去掉上清直接加DMSO，会导致结晶很难溶解，而残留培养液的颜色也会干扰最后吸光度的检测。但同时，我们常常也会将细胞结晶一起吸掉，而这样带来的误差要远远大于培养液没吸干净带来的误差。如果细胞本身数目太多，或者96孔板反复倾斜放平，会有许多结晶漂浮在培养液中，增加了操作的难度。平时我们都使用枪头吸去培养液，将96孔板倾斜，然后用枪尖慢慢吸。在这种方法中，枪头容易接触到孔底导致结晶脱落，而且会将培养液中漂浮的结晶一并吸掉，影响检测结果。此外，这种方法也不能很彻底的吸除培养液。

方法改进：用带针头的1ml医用注射器代替枪头吸取液体。将96孔板倾斜放置，用注射器沿着板壁仔细吸去培养液即可。

结果：由于1ml注射器的针头孔径较细较小，不会由于机械力造成结晶的脱落，同时可以彻底的吸掉培养液，而不带入漂浮在培养液中的紫色结晶。这使得测量结果更准确，复孔之间差异更小。
 

实验室创新技术火热征集中，五千元金奖等你拿！