创新参选:贴壁培养细胞MTT实验的改进

【字体: 时间:2012年09月25日 来源:生物通

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  MTT实验广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。活细胞内线粒体的脱氢酶可以将MTT还原生成结晶状的深紫色结晶formaza,之后被溶剂DMSO完全溶解,最后通过酶标仪测定570nm波长附近的吸光度……

  “赛默飞之生物通2012实验室创新技术大奖”评选活动开展以来,生物通已经陆陆续续收到不少项目,这些项目中有的能减少实验步骤,有的能降低实验成本,还有一些改进了实验设备,让我们的实验过程更加轻松。

生物通将会陆续公布一些项目,以便大家分享这些创新技术。同时为了感谢这些分享实验技巧的参选者,生物通也准备了一些精美礼品寄出,同时近期我们还将进行抽奖,以飨读者。


参选项目:贴壁培养细胞MTT实验的改进

背景:MTT实验广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。活细胞内线粒体的脱氢酶可以将MTT还原生成结晶状的深紫色结晶formaza,之后被溶剂DMSO完全溶解,最后通过酶标仪测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越快,则吸光度越高;细胞毒性越大,则吸光度越低。 我们一般使用96孔板进行检测,在加完MTT反应2-4小时后,须将孔内培养液尽量吸干净,再加DMSO溶解formaza。没有去掉上清直接加DMSO,会导致结晶很难溶解,而残留培养液的颜色也会干扰最后吸光度的检测。但同时,我们常常也会将细胞结晶一起吸掉,而这样带来的误差要远远大于培养液没吸干净带来的误差。如果细胞本身数目太多,或者96孔板反复倾斜放平,会有许多结晶漂浮在培养液中,增加了操作的难度。平时我们都使用枪头吸去培养液,将96孔板倾斜,然后用枪尖慢慢吸。在这种方法中,枪头容易接触到孔底导致结晶脱落,而且会将培养液中漂浮的结晶一并吸掉,影响检测结果。此外,这种方法也不能很彻底的吸除培养液。

方法改进:用带针头的1ml医用注射器代替枪头吸取液体。将96孔板倾斜放置,用注射器沿着板壁仔细吸去培养液即可。

结果:由于1ml注射器的针头孔径较细较小,不会由于机械力造成结晶的脱落,同时可以彻底的吸掉培养液,而不带入漂浮在培养液中的紫色结晶。这使得测量结果更准确,复孔之间差异更小。
 

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