创新参选:几种增强免疫荧光染色效果的方法

【字体: 时间:2013年03月28日 来源:生物通

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  传统免疫荧光染色技术多采用冰冻切片,不仅需要专门的冷冻切片机,切片技术不易掌握,而且切片过厚(≧8μm),导致细胞层叠,普通荧光显维镜难以观察,必须使用昂贵的共聚焦显微镜。此外冰冻组织长期保存也存在问题。

  

“赛默飞之生物通2012实验室创新技术大奖”评选活动开展以来,生物通已经陆陆续续收到不少项目,这些项目中有的能减少实验步骤,有的能降低实验成本,还有一些改进了实验设备,让我们的实验过程更加轻松。

参选项目:几种增强免疫荧光染色效果的方法

背景:

传统免疫荧光染色技术多采用冰冻切片,不仅需要专门的冷冻切片机,切片技术不易掌握,而且切片过厚(≧8μm),导致细胞层叠,普通荧光显维镜难以观察,必须使用昂贵的共聚焦显微镜。此外冰冻组织长期保存也存在问题。生物组织存在的自发荧光,以及荧光染料之间本身存在的干扰,严重影响了免疫荧光切片在高倍目镜下观察的效果,不利于精细结构的观察。

方法改进:

我们采用石蜡包埋,包埋好的组织块在4℃可长期保存,便于回顾性研究。石蜡切片厚度可降至3μm,细胞轮廓清晰,普通荧光显微镜即可观察。同时采用0.1%硼氢化钠(PBS配制)室温处理20分钟,然后0.5%苏丹黑室温处理3分钟,可明显降低自发荧光(Fig 1)。免疫荧光显微摄影后,再进行HE染色,经过常规脱水透明中性树胶封片,可以在普通显微镜下用油镜观察,与免疫荧光的阳性信号进行原位比对,不仅提供了更为细致的形态结构,而且增强了图片数据说服力(Fig 2)。

结果:


(Figure 1. The solution for background fluorescence. (A) Without antibody and fluorescent dyes, strong background fluorescence can be observed under different excitation wavelengths (554nm and 495nm), in the same region of chick thymus. (B) After treatment with sodium borohydride and sudan black, there is no obvious background fluorescence.)


(Figure 2. The solution for the observation of the fine structure. (A) The cell structure is not sharp,by using Cy3 to visualize TLR4 and DAPI for nucleus in chick thymus, photographed with a conventional fluorescence microscope (Zeiss AX10, Germany) (B) HE staining after immunofluorescence staining showed the fine structure in situ.)

 

赛默飞特约之生物通2012实验室创新技术评选活动: http://www.ebiotrade.com/custom/ebiotrade/cxjs-2012/index.htm

 

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