让荧光工具来升级你的RNA研究[新品推荐]

RNA研究的重要性不言而喻：RNA不仅是细胞中遗传物质和蛋白质的中间体，也在调控基因表达中扮演了重要角色。在许多病毒中，RNA也充当了基因组。对于RNA的分析和观察，过去多使用抗体和放射性标记，但随着荧光探针的出现，人们更倾向于使用这种新工具。灵敏特异，无放射性，方便多重分析。作为荧光方面的专家，Life Technologies旗下的Molecular Probes也推出了一系列RNA研究方面的工具。

观察RNA的合成

对细胞中新生RNA的观察有助于了解RNA合成的调控以及它在细胞内的运输。Click-iT® RNA成像和HCS试剂盒可通过荧光显微镜或高内涵筛选系统，进行新生RNA的检测。这些分析让EU（5-乙炔尿苷）掺入新生的RNA中，并利用Alexa Fluor® 叠氮化物来检测。EU中的炔烃和叠氮化物会发生click反应。

与传统的BrU分析相比，Click-iT® RNA分析优势明显。Alexa Fluor® 叠氮化物的体积比BrU抗体要小得多，这使得EU可在温和条件下掺入并被有效检测，从而避免了BrU检测所需的苛刻处理条件。整个反应可在30分钟内完成，且各个组分都是惰性的，无副反应发生。同时，它也方便了新生RNA与特定蛋白的多重分析。

Click-iT® RNA Alexa Fluor®成像试剂盒最近也用在多个研究中，以鉴定感染细胞中的宿主和病毒转录。在宿主转录被抑制之后，利用Click-iT® RNA分析可检测病毒RNA合成水平以及病毒RNA的亚细胞定位。

Click-iT® RNA成像试剂盒有红绿两种颜色可供选择，分别带有Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 594标记。试剂盒中还提供了蓝色的Hoechst 33342，用于细胞核的复染。

捕获新合成的RNA

由于传统的基因表达谱分析是基于总mRNA或稳态mRNA的定量，故总是偏向于高丰度、长寿命转录本的检测，而这些转录本也掩盖了基因表达的短期变化。于是，人们也开始将注意力放在新合成的RNA上。

Click-iT®新生RNA捕获试剂盒（Click-iT® Nascent RNA Capture Kit）采用了一种简单的方法将新转录的RNA与预先存在的RNA分开，从而有助于RNA稳定性、RNA合成、转录调控以及RNA衰减的研究。这一试剂盒也是通过click反应，让掺入EU的新合成RNA与生物素叠氮化物偶联。随后利用链霉亲和素磁珠捕获生物素化的RNA；接着进行逆转录和后续分析，如DNA测序、定量PCR分析或芯片杂交。值得一提的是，分析中所用的EU浓度无毒性影响，也不会改变整体转录。

此试剂盒包含了40次标记和捕获反应所需的试剂，为下游400次qPCR反应提供了足够的模板。

索取Click-iT Nascent RNA Capture Kit的更多信息

在DNA和蛋白存在时定量RNA

灵敏准确的核酸定量对RNA的下游分析很关键。大家通常都是利用分光光度计来定量DNA和RNA。尽管这种方法很常用，但它容易受到外界的干扰，游离的核苷酸、盐和有机物都会影响测量结果，DNA、RNA和蛋白也会互相干扰。

相比之下，核酸的荧光定量不仅更为灵敏，也更为特异。Qubit 2.0荧光计是Life Tech推出的第二代台式荧光计，可更为灵敏准确地定量核酸。而高度选择性的荧光定量分析也让RNA的定量不再受DNA和蛋白的干扰。

Qubit可准确定量同一样品中的DNA和RNA。Qubit RNA assay的线性检测范围在25-500 ng/mL。若样品的RNA浓度范围广，也可以选择Qubit RNA Broad-Range（BR）Assay Kit，它的线性检测范围在0.1-5 µg/mL。同时，有了Qubit，单链DNA、双链DNA和蛋白也能准确定量。索取资料

除了上面提到的这些荧光工具，Life Tech还提供了全面的RNA研究产品，TRIzol自不必说，在miRNA、RNAi以及qPCR/转录组分析上，Life Tech也一直有精彩产品呈上。（生物通 余亮）