NEB新款定点突变试剂盒上市[新品推荐]

生物通报道  New England Biolabs（NEB）公司近日推出了一款新的定点突变试剂盒——Q5® Site-Directed Mutagenesis Kit（Q5 SDM Kit）。这款试剂盒能够引入长的插入和缺失，从而让这一技术的适用范围更广。

Q5 SDM Kit能够进行标准的单碱基修饰，以及任何长度的插入或缺失，包括向克隆的蛋白上添加细胞核定位信号。据NEB的产品开发科学家John Pezza博士介绍，Q5 SDM Kit让之前认为定点突变无法开展的应用成为现实。例如，它能够更快地添加标签，引入大的缺失，添加或删除限制性酶切位点，以及进行其他序列修饰。

大家常用的定点突变方法多采用重叠引物，限制了插入或缺失的长度，而NEB采用一种不重叠的引物设计来实现更长的修饰。试剂盒采用NEB的新产品Q5超保真DNA聚合酶以及定制的突变引物，可在2小时内在各种质粒上创建插入、缺失和替换。

第一步是利用引物和Q5超保真DNA聚合酶预混液开展扩增。第二步是与独特的酶混合物一起孵育，这种混合物包括激酶、连接酶和DpnI。这些酶实现了PCR产物的迅速环化以及模板DNA的去除。最后一步是将产物高效转化进入感受态细胞。

在定点突变中，大家一定对引物设计颇为头疼。NEB也考虑到这一点，推出了NEBaseChanger™引物设计工具。这一工具包含一种新颖的功能，应用匹配和错配碱基的最接近热动力学来设计突变引物并计算退火温度。据Pezza博士介绍，这些调整增加了实验成功的可能性。NEBaseChanger还能提供实时的引物设计更新，这样用户可以反复修改自己的引物，看看阅读框和Tm如何受到影响。

在插入实验中，待插入的序列应添加到突变引物的5’端。对于>6 nt的插入，插入序列可分成两半。一半添加到正向引物的5’端，另一半添加到反向引物的5’端。引物3’端与质粒应至少有10 nt互补。据NEB网站介绍，此试剂盒最多可插入100个核苷酸，即每个引物的5’端后附加50个核苷酸。需要注意的是，长于60 nt的引物须采用HPLC或PAGE纯化。

Q5 SDM Kit包含了Q5热启动超保真聚合酶，其保真度比Taq酶高100倍，也是Phusion DNA聚合酶的2倍。试剂盒中还包含了高效的NEB 5-alpha感受态细胞。研究证实，长达14.3 kb的质粒也能获得可靠的结果。（生物通 余亮）

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