生物实验室安全性：如何处理紧急情况（二）

　　

上篇： 重提生物实验室安全性：如何处理紧急情况（一）

3.某些生化试剂染料

如常见的琼脂糖凝胶EB（溴化乙锭），吖啶橙染液，二甲基黄等

注意事项：

• 溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的 DNA 。这是一种强诱变剂，具有高致癌性，由于会在60－70度是蒸发，所以最好不要在胶太热的时候加，或者应该加到液体里，当EB加得过多时，也可以在室温用水将已染色的凝胶浸泡 20分钟，以降低未结合的EB引起的背景荧光。

由于溴化乙锭具有一定的毒性，实验结束后，应对含 EB 的溶液进行净化处理再行弃置，以避免污染环境和危害人体健康。如果不小心沾到皮肤上，可以用大量水冲洗。

还有DMSO也是毒性比较强的东西，用的时候要避免其挥发，要准备 1%-5% 的氨水备用，皮肤沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗涤。

此外，制造蛋白胶所用的丙烯酰胺属于中等毒性物质。可通过皮肤吸收及呼吸道进入人体，因此，在搬运和使用中必须穿戴好防护用具，如防毒服，防毒口罩及防毒手套等。由于此类毒素是累积毒性，不容易排毒，因此平时一定要多注意防护，治疗原则可用B族维生素、能量合剂，并辅以体疗、理疗及对症治疗。

5.生物因素

如一些具有传染性的病原微生物，不宜与本地生物接触的样品等

注意事项：

• 生物实验后废弃的生物活性材料，如解剖及实验处理后的动物尸体，培养的特种细胞和微生物，它们的培养废液等，如果不进行正当处理或直接排放，由于许多实验室的下水道与一般生活污水的下水道是相通的，因此污染物通过下水道形成交叉污染，因此需要进行妥善处理。
• 美国的实验室安全管理规定有详细的要求，比如: 血液类标本的存放容器必须带有螺旋盖，并需专门的支架放置在包装盒中，运输过程中容器保持瓶口向上 在包裹的周围应备有充足的吸水纸用以防意外情况下液体的泄漏，如果运输样品可以在24h内送标本实验室，由于大多数病原体可以直接采取室温条件运输，对于长途运输的生物样品最好能保持在4～8度。
• 国内的《病原微生物实验室生物安全管理条例》规定：运输高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本，应当通过陆路运输；没有陆路通道，必须经水路运输的，可以通过水路运输；紧急情况下或者需要将高致病性病原微生物菌（毒）种或者样本运往国外的，可以通过民用航空运输。

2011年在芝加哥大学曾有一名女性研究人员因为实验室里一种用于研究的细菌而发生皮肤感染，最终导致住院，芝加哥大学官方称，引起这次感染事件的是一种名为蜡状芽孢杆菌的细菌，这种细菌可通过食物传播，引起食物中毒。还有2010年东北农业大学应用技术学院畜禽生产教育0801班30名学生在动物医学学院实验室进行“羊活体解剖学实验”的时候，几位学生都感染了乙类传染病。

出现这些情况的时候，生物实验手册要求应脱下受害人的防护服并进行医学处理，要报告食入材料的鉴定和事故发生的细节，并保留完整适当的医疗记录。出现容器破碎及感染性物质的溢出，应当立即用布或纸巾覆盖受感染性物质污染或受感染性物质溢洒的破碎物品。然后在上面倒上消毒剂，并使其作用适当时间。然后将布、纸巾以及破碎物品清理掉；玻璃碎片应用镊子清理。然后再用消毒剂擦拭污染区域。如果用簸箕清理破碎物，应当对他们进行高压灭菌或放在有效的消毒液内浸泡。用于清理的布、纸巾和抹布等应当放在盛放污染性废弃物的容器内。在所有这些操作过程中都应戴手套。

如果有潜在危害性气溶胶的释放（在生物安全柜以外），那么所有人员必须立即撤离相关区域，任何暴露人员都应接受医学咨询。应当立即通知实验室负责人和生物安全官员。并应张贴“禁止进入”的标志。

当然最重要的一个方面还是提前预防，其实实验室安全性问题关注已久，然而却渐渐成为一块“鸡肋”——食之无味，弃之可惜，往往初进入实验室的研究人员在之前的种种警告之下会额外小心注意，久而久之却“习惯成自然”，置若罔闻或形式主义了。

以上是对于各级生物安全的具体要求，来自《WHO实验室生物安全手册》，里面提及的一些基本生物安全设备（二级实验室）包括：

1、移液辅助器——避免用口吸的方式移液。有不同设计的多种产品可供使用。

2、生物安全柜，在以下情况使用：
—— 处理感染性物质；如果使用密封的安全离心杯，并在生物安全柜内装样、取样，则这类材料可在开放实验室离心
—— 空气传播感染的危险增大时
—— 进行极有可能产生气溶胶的操作时（包括离心、研磨、混匀、剧烈摇动、超声破碎、打开内部压力和周围环境压力不同的盛放有感染性物质的容器、动物鼻腔接种以及从动物或卵胚采集感染性组织）。

3、一次性塑料接种环，也可在生物安全柜内使用电加热接种环，以减少生成气溶胶。

4、螺口盖试管及瓶子。

5、用于清除感染性材料污染的高压灭菌器或其他适当工具。

6、一次性巴斯德塑料移液管，尽量避免使用玻璃制品。

7、在投入使用前，像高压灭菌器和生物安全柜等设备必须用正确方法进行验收。

还有对于污染性材料和废弃物的处理和丢弃程序：

要对感染性物质及其包装物进行鉴别并分别进行处理，相关工作要遵守国家和国际规定。废弃物可以分成以下几类：

1、可重复或再使用，或按普通“家庭”废弃物丢弃的非污染（非感染性）废弃物

2、污染（感染性）锐器——皮下注射用针头、手术刀、刀子及破碎玻璃；这些废弃物应收集在带盖的不易刺破的容器内，并按感染性物质处理

3、通过高压灭菌和清洗来清除污染后重复或再使用的污染材料

4、高压灭菌后丢弃的污染材料

5、直接焚烧的污染材料。

更多注意事项：

（1）遇到危险或不安全操作时：经常考虑是否有安全些的操作，用较安全操作代替危险操作。

（2）搅拌均匀，防止局部反应：有些激烈反应，如不及时搅拌，放出热量积聚于局部，局部反应愈来愈迅速、猛烈，而发生危险。控制这种反应，最好使用高速搅拌，外部冷却。

（3）控制反应温度：温度愈高，反应愈快。每升高十度，反应速度约增加二倍左右。一般选用溶剂（沸点固定），使反应局限于该溶剂的沸点附近。此外，用加料速度，外冷等手段控制反应温度。

（4）注意诱导反应后，再正常加料：很多化学反应，尤其是有机反应，物料混合后，即使加热，也不立即起反应，但一旦发生反应，就很猛烈，易造成事故。对这类反应，大多数控制加料，先加料少量，加热诱起反应。如无反应，勿大量加料，只能再加少量料，直到诱起反应以后，再正常慢慢加料，连续反应。

（5）整个实验过程，密切注意观察和记录反应现象：许多反应，在出意外之前，都有些先兆，如温度上升、压力增高、冒白烟等等，使许多有经验的人，及时观察，避开去，或者早已准备措施在手。发现了危险先兆，可以采取紧急措施，如关火、冷却，内部加冰、加水降温至反应温度以下等。

（6）操作要注意不让有害气体逸出：可回流的冷却回流，可吸收的吸收。注意冷凝效率和吸收效率。用安全的密闭操作，代替开口操作。