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转染级质粒中抽自动化提取方案

【字体: 时间:2020年12月10日 来源:基因有限公司

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  NucleoBond® Xtra Midi automated on Andrew+可以轻松自动化地同时进行多达6个质粒midi预处理,为您提供了一个选择,避免了繁琐的手工质粒纯化过程。

质粒是存在于细菌、真菌等微生物细胞中、独立于染色体外、能进行自我复制的遗传因子。

从1952年,揭示细菌中存在的F因子并命名为质粒到目前质粒在基因工程和分子生物学中的广泛应用,除了常规的基因克隆技术外,以质粒为载体在原核生物和真核生物中表达外源蛋白的方法和技术、shRNA干扰技术、基因编辑技术等均已在工、农、医各个领域中得到广泛应用。


质粒DNA的应用发展史

因此,对质粒的研究无论在理论上或应用上均具有十分重要的意义,是现代生物学研究中的重要课题之一。

随着应用领域的不断拓展,对质粒的要求也是越来越高。

1. 比如按照后续应用中,对质粒内毒素的不同,分为测序克隆级质粒(>50EU/µg DNA)、转染级质粒(<50EU/µg DNA)和无内毒素级质粒(<0.1EU/µg DNA)。

2. 比如按照后续实验中质粒的用量不同,分为小抽(30µg)、中抽(500µg)、大抽(1mg)、Mega(2mg)、Giga(10mg)等。

3. 比如按照提取原理,分为离心法硅胶膜柱和重力过柱阴离子交换树脂柱。无需离心的重力过柱,对质粒的超螺旋结构保护性较好。

4. 随着质粒用量和质粒种类的增加,除了以上质粒质量的要求外,高通量或自动化是对质粒提取越来越重要的要求。

测序级或转染级质粒小抽,由于上样体积的常规化和提取过程的简便,可以实现在仪器上面的自动化提取。但是质粒中抽,由于需要抽提较大体积的菌液比如50-200ml,实验中需要用到大体积的EP管,难有合适的仪器适配器;对于转染级或无内毒素级质粒提取过程更复杂,流程设置更繁琐等,诸多因素限制了质粒中抽的自动化进程。

在色谱技术和核酸纯化方面有着丰富的经验德国MACHEREY-NAGEL (MNG)联合全球知名分析仪器公司美国Andrew Alliance一起开发了硬件和协议,NucleoBond® Xtra Midi automated on Andrew+,可以轻松自动化地同时进行多达6个质粒midi预处理,为您提供了一个选择,避免了繁琐的手工质粒纯化过程。


NucleoBond® Xtra Midi automated on Andrew+

MNG 出产的NucleoBond® Xtra Midi kits 采用阴离子交换树脂技术,更低的硅树脂填料,更大的柱膜面积,裂解液和缓冲液在重力柱中的流动更快,省时快捷的同时,对质粒的二级结构保护性加强。特别的column filters设计,让裂解液过滤和过柱一步完成,简化了操作流程。

试剂盒参数:

Andrew Alliance的云本地软件平台和现代化的界面极大地提高了自动化技术的使用,改善了耗时的手动滴管到无错误和容易编程的机器人时代。通过Andrew+可获得重复的数据和伴随的软件(OneLab),提供最直观的方案设计和实验可追溯性的解决方案。

NucleoBond® Xtra Midi 和配备了相应支架的Andrew+机器人,完成从裂解液澄清到洗脱和质粒DNA纯化浓缩的所有步骤,让实验工作者极大的解放了双手,为您节省宝贵的时间进行真正的科学研究。


质粒提取过程


Andrew+ 自动化配置

自动化NucleoBond® Xtra Midi应用数据
 
优越的质粒产量和纯度-手工或自动制备

不同湿重的高拷贝质粒的大肠杆菌分别通过NucleoBond® Xtra Midi程序,手动(一个样本提取一次)或在Andrew+机器人上自动(一个样本提取二次)进行。手动处理和自动预处理在质粒构象、收率和纯度方面都有很好的结果(A260/280)。
 
减少样本批间差

分别用NucleoBond® Xtra Midi procedure提取试剂盒,手动和Andrew+机器人提取0.8g E.coli 高拷贝质粒 (blue bar; n=6每种方法). 两种方法均可纯化出较多的质粒,但是自动化方法提取的质粒得率方差(± 15.8 μg)比手动提取(± 45.6 μg)更低。因此,Andrew+自动化仪器可以降低NucleoBond® Xtra Midi提取过程中的样本批间差。

请扫描以上二维码或联系基因有限公司咨询NucleoBond® Xtra Midi automated on Andrew+系统,或申请手动提取NucleoBond® Xtra Midi试剂盒试用装。

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