一种同时获得DNA、RNA以及高得率蛋白质的提取方法

从一个生物学样品中同时提取DNA，RNA和蛋白质一直是实验人员理想的情景。这样做不仅可以节省宝贵的样本，更重要的是可以直接比较基因组，转录组和蛋白质组学信息，最大程度减少样本差异，获得更准确的实验结果。

然而，能够实现此功能的试剂盒不仅价格昂贵，而且普遍存在核酸提取完后，蛋白得率低的问题。使用TRIzol提取RNA，自1987年建立以来一直是经典的 RNA提取方法，根据三种生物大分子的溶解度不同，样品中加入TRIzol并离心后，能够有效的将RNA保留在最上层水相，将DNA保留在中间层，最底层有机相中则存储着蛋白质。今天，小编为大家介绍一种优化的、从已经提取完核酸的TRIzol有机相中高效提取蛋白质的方法。话不多说，直接上方案：

▶从一个生物学样本中同时提取DNA，RNA和蛋白质

与传统方法相比，该方法做了如下优化：

1. 组织匀浆步骤采用Bullet Blender Tissue Homogenizer (Next Advance, United States)替代手工液氮研磨。NAI Bullet Blender 组织匀浆仪采用专利的击打技术，样品匀浆更彻底，得率高，且独立封闭操作无样品交叉污染。采用空气制冷，能够保证生物大分子完整性。

2. 相分离步骤采用1-溴-3-氯丙烷替代氯仿。相比后者，1-溴-3-氯丙烷毒性更低，而且更有助于形成致密的中间层。

3. 蛋白沉淀步骤采用乙醇和水替代异丙醇，以获得更高的蛋白得率。

4. 蛋白溶解步骤采用含有尿素的SDS buffer。无需加热或超声等额外操作便能够有效溶解高分子蛋白，从而提高得率。

验证实验结果表明，对比直接用RIPA裂解液对组织进行蛋白抽提，使用优化的TRIzol方法从已经提取完DNA，RNA而剩余的有机相中提取肌肉蛋白，具有更高的蛋白得率（Figure 1.A）。尤其对于高分子量大蛋白的提取效率更高，这可能得益于更有效的溶解（Figure 1.B）。

同时，使用该方法提取蛋白可直接用于下游Western blot实验。能够准确辨别出 MyHC在增殖的C2C12细胞中不表达，但是在分化的细胞中表达（Figure 2.A）。而对于磷酸化Western blot，也鉴定出超负荷所造成的肌肉肥大组中Akt和RPS6的磷酸化水平上升Figure 2.B,C）。

总结一下，小编今天为大家介绍了一款便宜、简单、快速的从TRIzol有机相中高得率提取蛋白的方法，帮助大家实现从一个生物样本中同时获得DNA、RNA和蛋白质，并且与下游的Western blot实验直接兼容。特别要提醒的是，美国Next Advance 公司研发的Bullet Blender是一款新颖、快速、高通量、高稳定性的组织细胞匀浆仪，具有样品匀浆更彻底、得率高、通量高、无交叉污染、生物大分子完整性好等特点，满足您多方面的样品匀浆需求。

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参考文献：

Wen Y, Vechetti IJ Jr, Valentino TR, McCarthy JJ. High-yield skeletal muscle protein recovery from TRIzol after RNA and DNA extraction. Biotechniques. 2020 Oct;69(4):264-269. doi: 10.2144/btn-2020-0083. Epub 2020 Aug 11. PMID: 32777951; PMCID: PMC7566772.