生物通 | 新技术专栏

一种同时获得DNA、RNA以及高得率蛋白质的提取方法

【字体: 时间:2020年12月21日 来源:基因有限公司

编辑推荐:

  小编今天为大家介绍了一款便宜、简单、快速的从TRIzol有机相中高得率提取蛋白的方法,帮助大家实现从一个生物样本中同时获得DNA、RNA和蛋白质,并且与下游的Western blot实验直接兼容。

从一个生物学样品中同时提取DNA,RNA和蛋白质一直是实验人员理想的情景。这样做不仅可以节省宝贵的样本,更重要的是可以直接比较基因组,转录组和蛋白质组学信息,最大程度减少样本差异,获得更准确的实验结果。

然而,能够实现此功能的试剂盒不仅价格昂贵,而且普遍存在核酸提取完后,蛋白得率低的问题。使用TRIzol提取RNA,自1987年建立以来一直是经典的 RNA提取方法,根据三种生物大分子的溶解度不同,样品中加入TRIzol并离心后,能够有效的将RNA保留在最上层水相,将DNA保留在中间层,最底层有机相中则存储着蛋白质。今天,小编为大家介绍一种优化的、从已经提取完核酸的TRIzol有机相中高效提取蛋白质的方法。话不多说,直接上方案:


▶从一个生物学样本中同时提取DNA,RNA和蛋白质

与传统方法相比,该方法做了如下优化:

1. 组织匀浆步骤采用Bullet Blender Tissue Homogenizer (Next Advance, United States)替代手工液氮研磨。NAI Bullet Blender 组织匀浆仪采用专利的击打技术,样品匀浆更彻底,得率高,且独立封闭操作无样品交叉污染。采用空气制冷,能够保证生物大分子完整性。

2. 相分离步骤采用1-溴-3-氯丙烷替代氯仿。相比后者,1-溴-3-氯丙烷毒性更低,而且更有助于形成致密的中间层。

3. 蛋白沉淀步骤采用乙醇和水替代异丙醇,以获得更高的蛋白得率。

4. 蛋白溶解步骤采用含有尿素的SDS buffer。无需加热或超声等额外操作便能够有效溶解高分子蛋白,从而提高得率。

验证实验结果表明,对比直接用RIPA裂解液对组织进行蛋白抽提,使用优化的TRIzol方法从已经提取完DNA,RNA而剩余的有机相中提取肌肉蛋白,具有更高的蛋白得率(Figure 1.A)。尤其对于高分子量大蛋白的提取效率更高,这可能得益于更有效的溶解(Figure 1.B)。

同时,使用该方法提取蛋白可直接用于下游Western blot实验。能够准确辨别出 MyHC在增殖的C2C12细胞中不表达,但是在分化的细胞中表达(Figure 2.A)。而对于磷酸化Western blot,也鉴定出超负荷所造成的肌肉肥大组中Akt和RPS6的磷酸化水平上升Figure 2.B,C)。

总结一下,小编今天为大家介绍了一款便宜、简单、快速的从TRIzol有机相中高得率提取蛋白的方法,帮助大家实现从一个生物样本中同时获得DNA、RNA和蛋白质,并且与下游的Western blot实验直接兼容。特别要提醒的是,美国Next Advance 公司研发的Bullet Blender是一款新颖、快速、高通量、高稳定性的组织细胞匀浆仪,具有样品匀浆更彻底、得率高、通量高、无交叉污染、生物大分子完整性好等特点,满足您多方面的样品匀浆需求。

基因有限公司作为Next Advance在中国区的代理商,邀请您一同关注我们的官方公众号“基因快讯”。如下了解更多信息,回复本微信或直接联系您身边的基因有限公司员工即可。

参考文献:

Wen Y, Vechetti IJ Jr, Valentino TR, McCarthy JJ. High-yield skeletal muscle protein recovery from TRIzol after RNA and DNA extraction. Biotechniques. 2020 Oct;69(4):264-269. doi: 10.2144/btn-2020-0083. Epub 2020 Aug 11. PMID: 32777951; PMCID: PMC7566772.

订阅生物通快讯

订阅快讯:

最新文章

限时促销

会展信息

关注订阅号/掌握最新资讯

今日动态 | 生物通商城 | 人才市场 | 核心刊物 | 特价专栏 | 仪器云展台 | 免费试用 | 今日视角 | 新技术专栏 | 技术讲座 | 技术期刊 | 会展中心 | 中国科学人 | 正牌代理商

版权所有 生物通

Copyright© eBiotrade.com, All Rights Reserved

联系信箱:

粤ICP备09063491号