核酸POCT，趁手兵器拿走不谢

——Tiosbio系统化核酸检测试纸条

　　

19年的非洲猪瘟20年的新冠，充分暴露了传统核酸检测的场地和速度瓶颈，核酸POCT的呼声越来越大。其中MIT张锋团队开发的CRISPR诊断技术无疑是创新的后浪，自去年推出之后，整个学术和产业界都在迅速跟进。在CRISPR/Cas12/13的开发中，可视化的核酸检测试纸条不可或缺。Tiosbio整合之前产品，推出了核酸检测试纸条系列，已成功用于多个CRISPR项目中。

1． Tiosbio®一次性核酸检测试纸条（彩虹型）（JY0201）

采用双抗体夹心免疫层析快速检测核酸扩增产物。将上游和下游引物分别用生物素（Biotin）和异硫氰酸荧光素（FITC）或6-羧基荧光素（6-FAM）进行标记，扩增后两种标记物可同时整合到双链扩增产物上，通过抗BIOTIN和抗FITC两种抗体夹心进行检测。

为什么要把核酸试纸条做成彩虹的？这个是我们经常遇到的问题。那就是在做RPA的时候会出现适配体反应的假阳性。如果2条线的颜色一样，这种假阳性是检测不出来的。如果用彩虹试纸条，C线和T线都显示蓝色，或者只T线显示蓝色。那么就表明有适配体反应了。您的引物就需要换掉。

2． Tiosbio® Cas12/13专用核酸检测试纸条（JY0301）

CRISPR诊断技术利用的是cas酶在切割目的片段时会非特异性的切割单链核酸片段的功能，当在体系中引入两端分别标记生物素和FITC的探针核酸片段后。专用的试纸条CT线位置和彩虹型互换：当探针完好时，可将结合在探针上的胶体金标记抗体完全捕获。阳性时，不能完全捕获，则部分胶体金标记抗体越过C线，被T线捕获。

经过Tiosbio精细调整的Cas12/13专用核酸检测试纸条（JY0301）还可用于探针合成质量的鉴定。如探针合成纯度不足，即探针含游离的Biotin或者游离的FITC时，会导致以超纯水作阴性对照的切割产物T线显红色，即阴性对照呈现假阳性结果。在正式试验前，可调整空白阴性对照中探针的使用浓度至200 nM，并进行切割反应。当试纸条结合垫端浸入Cas12/Cas13切割产物后的5~7 min内，试纸条T线显红色，即说明探针纯度难以满足实验要求，会因探针纯度不足导致假阳性结果。建议更换探针合成供应商，并重新合成探针。本产品在探针使用浓度为20~50nM的情况下，试纸条结合垫端浸入Cas12/Cas13切割产物后的30 min内，T线均不会显色。

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