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全自动的细胞计数虽然省心,也要注意这几点

【字体: 时间:2021年04月13日 来源:生物通

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  近年来,许多实验室将这个工作交给了自动细胞计数器,不光省时省力,还能获得高质量的数据。如何提高自动细胞计数的准确性?本文给出了一些专家建议。

即使你的耐心很好,细胞计数也是一项艰苦的工作。过去,人们需要使用显微镜,对血球计数器各个网格中的细胞进行计数。一不留神就会出错,而且每个人的结果可能不一样。近年来,许多实验室将这个工作交给了自动细胞计数器,不光省时省力,还能获得高质量的数据。如何提高自动细胞计数的准确性?本文给出了一些专家建议。

自动细胞计数器

自动细胞计数器有不少优点,如节省时间,减少人为错误,提高实验通量,提高细胞计数的准确性和重现性。计数是通过光学方法(明场或荧光成像)或阻抗方法完成的。一些型号的计数器使用一次性玻片,而另一些使用特殊校准的样本室,比如DeNovix的 CellDrop全自动细胞计数器(DeNovix的核心团队曾开发出NanoDrop)。

Logos Biosystems的新型双荧光自动细胞计数器既能使用标准的计数板,也能使用多通道计数板,在样本通量上较为灵活。它的CountWire™软件系统符合21 CFR Part 11要求,可以支持诸如CAR T细胞之类的细胞疗法开发。大多数的自动细胞计数器都是台式仪器,但默克密理博的Scepter™细胞计数器是手持设备,还配备了WiFi和蓝牙功能。

Scepter™细胞计数器是基于电阻抗原理对细胞进行计数,而不是成像。据MilliporeSigma公司细胞培养工具部门主管Michele Halter介绍,Scepter™ 3.0手持式自动细胞计数器的主要优势在于其高通量能力,能够高度精确地测定数千个细胞,而不需要样本制备、专门试剂或有害染料。基于阻抗的计数器给出的是细胞数量和细胞大小,但不能像成像方法那样区分活细胞和死细胞。

熟悉您的计数器

对于细胞计数这种简单的事情,研究人员因为了解仪器的基本原理而忽略了重要功能或设置的情况并不在少数。Logos Biosystems公司的应用专家Tim Steppe建议您花半个小时来了解您的计数器可以做什么和不可以做什么。“我们有一个客户在比较不同的计数方案,却搞不清楚为什么每个方案产生了截然不同的结果,”他说。最后发现,他们在设置稀释因子时使用了不同的数值。

更重要的是,在熟悉仪器之后,您就能够轻松优化特定样本的设置。DeNovix的科学总监Dan Schieffer表示:“自动细胞计数器带有一系列设置,能够针对特定细胞类型来优化图像捕获和分析。这些选项值得您花时间去了解一下,因为正确的对焦和曝光至关重要,特别是对于活细胞/死细胞计数而言。”

使用最合适的方法

选择一种有效的细胞计数方法,并配备一个相应的细胞计数器。计数细胞的最佳染色方法取决于您的样本类型。对于培养的细胞,标准的台盼蓝染色就足够了。“大多数基于图像的计数器都具有明场功能,可以对台盼蓝染色的细胞进行计数,”Steppe说。“不过对于更复杂的样本,比如全血、解离组织、原代细胞或干细胞,最好采用核酸染料,如吖啶橙或碘化丙啶,它们需要双重荧光计数器。”Schieffer也同意这种说法,认为碎片多的细胞或大多数原代细胞最好使用荧光方法,以便区分活细胞、死细胞和细胞碎片。

样本量和稀释度

样本量也会影响计数的准确性,因此选择适当的稀释度也很重要。“太密集或太稀疏的样本将难以计数,并且不能代表整个样本,”Schieffer说。“用户需要对细胞样本进行稀释或浓缩,以确保它们处于可测量的范围内。”此外,对较多的细胞进行计数也可以提高计数准确性。

操作中的注意事项

在实验操作中,保持良好的操作习惯对提高细胞计数的准确性也大有裨益。例如,在取出样本并上样到计数板之前,应当充分混匀细胞。“细胞并不是均质的溶液,而是会在溶液中快速沉降,因此在上样之前应将样本充分混合,”Schieffer谈道。“若不注意这一点,则会带来重复性的问题。”胰蛋白酶消化不完全而带来的细胞团块也会导致细胞计数不准确。

定期检验细胞计数器的性能也是一种明智之举。Steppe表示:“你可以对已知浓度的微珠溶液进行计数,从而验证其性能,或对QC玻片进行计数,实现更精确的验证。”他建议每1-3个月对细胞计数器进行一次验证。“大多数自动计数器可以直观地显示样本中哪些细胞被计数了,”Schieffer说。“您需要检查这张图片,确保计数的细胞符合您的预期,并在必要时进行调整,这一点非常重要。”

许多自动细胞计数器的基本功能都是相同的,因此大家可能觉得它们完全一样,但实际上它们的性能还是有所差异。Steppe强烈建议用户试用几种型号,并确保至少有一种可以对特定应用中所使用的样本进行准确计数。“我们发现,不止一个实验室因仓促选择产品而受到影响,他们往往看中的是方便,而不是性能。”在购买之前试用产品有助于您了解细胞计数器的表现。

(作者:Caitlin Smith/生物通编译)

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